金花茶多糖的分离纯化及化学结构研究

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金花茶是山茶科、金花茶组、金花茶系植物,是茶花世界中唯一具有金黄色基因的品种,被人们誉为“茶族皇后”和“植物界的大熊猫”。金花茶叶作为广西壮族民间传统的一种中草药,具有降血糖、降血脂、降血清中胆固醇、抑制肿瘤生长、提高机体免疫能力等多种生理功能。本文对金花茶多糖的超声波提取工艺、降血脂功能、分离纯化条件、部分理化性质及其化学结构进行了研究,为合理开发利用金花茶这一珍贵资源及进一步解释降脂机制奠定理论基础。 研究的主要内容及结果如下: 1、金花茶多糖的超声波提取工艺研究:通过单因素和正交实验对超声波提取金花茶多糖的工艺进行了研究,探讨了料液比、提取温度、提取时间及超声波频率这四个影响因素,确定了金花茶多糖的最佳提取工艺条件:料液比1:50、温度80℃、时间1.0h、超声波频率为53.2KHz,在该条件下多糖的得率为3.1%。同时将超声波法与传统浸提法进行比较,结果表明采用超声波提取法茶多糖的得率提高了47.62%。 2、金花茶粗多糖的初步分离纯化:通过除蛋白、透析等方法对超声波提取得到的粗多糖进行了初步分离,初步纯化后的多糖TPS总糖含量达到83%,TLC分析TPS是由半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的复杂的混合多糖。 3、金花茶多糖的降血脂功能研究:以初步纯化后的TPS喂食高血脂症的小鼠,探讨其降血脂的功能。结果表明:金花茶多糖的高、中、低三个剂量组均能极其显著的降低高血脂症小鼠血清中的TC、TG和LDL-C水平,提高HDL-C/TC比值。灌胃2周后,金花茶组小鼠血清的TC水平均可达到正常组水平,且效果优于血脂康胶囊。结果表明金花茶多糖具有明显的降血脂功能。 4、金花茶多糖的分离纯化及化学结构研究:首先用DEAE-Cellulose(HCO3-型)阴离子交换纤维素柱对初步纯化后的TPS进行分离,得到TPSO、TPS1、TPS2、TPS3、TPS4,TPS5共六个组分。然后再用DEAE-Cellulose(B4O72-型)对TPS2、TPS3进一步纯化,TPS2分离出了TPS2-A、TPS2-B、TPs2-C、TPS2-D四个组分,TPS3则主要分离出了TPS3-C、TPS3-D两个组分,对以上六个组分进行了理化性质和构成单糖的分析,初步判断以上组分均为果胶多糖,属于酸性多糖。 采用葡聚糖凝胶SephacrylS-200对TPS2-A、TPS2-B、TPS2-C、TPS2-D、TPS3-C、TPS3-D进行了均一性验证和分子量测定。结果发现以上六个组分均是在一定分子量范围内均一的组分,分子量依次为88,000、63,000、105,000,75,000,45,000和53,000。 对TPS2-A和TPS3-C进行了红外光谱分析发现,它们两者均具有多糖的特征吸收峰,糖环为吡喃环,具有羧基的特征吸收峰,TPS2-A主要以β-糖苷键连接,含有少量的α-糖苷键,而TPS3-C中主要的糖苷键型为β-糖苷键。TPS2-A的构成单糖及其比例为:阿拉伯糖:半乳糖:鼠李糖:半乳糖醛酸:葡萄糖:甘露糖=3.33:1.92:0.88:3.70:0.10:0.05;TPS3-C的构成单糖及其比例为:阿拉伯糖:半乳糖:鼠李糖:半乳糖醛酸=4.39:2.00:0.91:2.65。推测它们是带有不同中性糖侧链的鼠李半乳糖醛酸聚糖。
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