背景消渴丸成品药包括中药成分：黄芪、生地黄、天花粉、葛根、五味子、山药、玉米须；以及西药成分：格列本脲。二者之间有很好的定量关系。从西医的角度来看,消渴丸中定量的格列本脲有良好的降低血糖的作用,从而减轻了糖毒性作用,保护了胰岛功能；从中医角度上看,消渴丸具有滋阴补肾、益气生津等功效。既往研究表明,消渴丸对糖尿病治疗有较好的作用,对糖尿病各种并发症的预防及治疗也有一定意义。但到目前为止,有关消渴丸防治糖尿病及其并发症作用机制的研究还不够充分。为此,进一步对消渴丸的作用机制加以研究实属必要。血管内皮紊乱是糖尿病相关并发症发生和发展的关键一步,因此,选取血管内皮细胞作为研究对象来研究消渴丸对内皮细胞生长和功能的影响,可以为探讨消渴丸可能的保护机制提供方向。目的实验第一部分,摸索并总结合适的人脐静脉内皮细胞提取和培养方法,为接下来的药物实验提供研究对象。实验第二部分,通过体外细胞培养,采取直接添加药物的方法,观测消渴丸对人血管内皮细胞功能的影响,以及消渴丸中药成分对内皮细胞增殖的作用,以探讨消渴丸对人血管内皮细胞的保护作用及其可能的机制,为进一步研究消渴丸的药理作用作镝垫。方法原代培养获取人脐静脉内皮细胞,选取第3代细胞,接种于24孔板中,待细胞贴壁后,进行药物干预试验：分成3个浓度组,根据格列本脲浓度依次为2ng/ml、20ng/ml和200ng/ml,每个浓度组内再分为格列本脲组、消渴丸成品组、消渴丸纯中药成分组和空白对照组,每个组样本量为8。继续培养24h,显微镜下观察细胞生长状态,并吸取细胞培养液分别测定NO含量。消渴丸对内皮细胞增殖的影响试验：制备第3代人脐静脉内皮细胞悬液,分成四个组,每组8孔,1×105个细胞/孔。a空白对照组,b消渴丸中药成分粗提液低浓度组(2×10-5g/ml),c消渴丸中药成分粗提液中浓度组(4×10-5g/ml),d消渴丸中药成分粗提液高浓度组(2×10-4g/ml),培养1,3,5天后分别进行细胞计数。所得数据采用软件SPSS17.0进行分析,组与组之间均选择t检验。结果初步研究显示：三个浓度下,消渴丸成品组和消渴丸纯中药成分组NO含量相对于格列本脲组和空白对照组均明显升高(P<0.001),消渴丸成品组与消渴丸纯中药成分组相比,NO含量无明显差别(P>0.05),并且随着药物浓度的递增,NO含量也明显上升(P<0.05)。消渴丸对内皮细胞增殖的影响试验发现：与空白对照组相比较,高剂量的消渴丸中药成分粗提液对血管内皮细胞有抑制其生长的作用,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论消渴丸在体外细胞培养环境中,可以提高NO的含量,而且随着药物浓度的递增,NO浓度也随之增加,并且发现,这主要是来自消渴丸的中药成分的作用。这可能是消渴丸保护血管内皮的一种机制。另外,高剂量的消渴丸中药成分粗提液对血管内皮细胞有抑制其生长的作用,且差异具有统计学意义(P<0.05)。