胶原纤维固化金属离子吸附材料的制备及其对蛋白质、酶和微生物的吸附特性研究

被引量 : 12次 | 上传用户:dddddddaaaaaaaa
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根据制革原理,将金属离子Fe3+、Zr4+和Al3+固定在胶原纤维上制备了新型吸附材料,并研究了这类吸附材料的物化性质。实验结果表明,胶原纤维对金属离子具有较高的固载容量,其中锆和铁的固载量分别可达563mg/g和319mg/g,且固化的金属离子耐水溶液萃取。胶原纤维与金属离子反应后,其热稳定性和等电点明显比胶原纤维高,此外,比表面积增加,吸附孔径减小。这说明,作为吸附材料使用,胶原纤维固化金属离子具有更好的性能。胶原纤维及其固化金属离子材料对蛋白质和酶的吸附实验结果表明:胶原纤维对多种蛋白质和酶具有一定的吸附作用,但其吸附容量远低于胶原纤维固化金属离子的吸附容量,说明固载的金属离子在吸附过程中起着重要作用。胶原纤维固化金属离子材料对蛋白质和酶的最佳吸附pH值随着蛋白质和酶以及金属离子的种类不同而不同。研究了胶原纤维固化铁对溶菌酶的吸附特性,包括温度、pH、初始浓度和离子强度对吸附容量的影响,以及吸附等温线、吸附动力学、固定床吸附动力学和吸附剂的解析性能。结果表明:当pH为8.0时,胶原纤维固化铁对溶菌酶的吸附容量最大,这是由于溶菌酶在固定化金属离子材料上的吸附作用主要是通过金属离子与溶菌酶分子上的组氨酸之间的螯合作用而进行的,而大多数蛋白质分子上组氨酸残基的pKa值在5.5~8.5范围内。当氯化钠浓度为0和0.25M时,胶原纤维固化铁对溶菌酶的吸附容量分别为最大和最小,这是由于金属离子亲和色谱对蛋白质的吸附在低盐浓度下主要通过蛋白质与金属离子间的螯合作用进行,在高盐浓度下主要通过疏水作用进行。吸附容量随温度和起始浓度的升高而增大,表明有化学吸附存在。当溶菌酶的起始浓度为2.5 mg/mL,吸附液体积为25mL,吸附剂用量为0.100 g时,30℃条件下胶原纤维固化铁对其的吸附量可达395 mg/g。Langmuir方程可以很好地拟合胶原纤维固化铁对溶菌酶的吸附等温线。当吸附时间为8h时,基本达到吸附平衡,吸附动力学可以用拟二级速度方程进行拟合,计算得到的平衡吸附量与实测值吻合得很好。0.25mol/L氯化钠、0.3mol/L咪唑和0.01mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)的混合溶液对溶菌酶的解吸效果最好,其解吸率和酶活保存率分别可达96.7%和94.1%;胶原纤维固化铁吸附柱对溶菌酶具有良好的吸附柱动力学特性,能将溶菌酶大大地浓缩。吸附柱可以再生和重复使用。研究了胶原纤维固化铁对溶菌酶和白蛋白的选择性吸附。结果表明:当pH4.0时选择性吸附白蛋白,而当pH8.0时选择性吸附溶菌酶。以胶原纤维固化铁或固化锆为固定床填料,研究其从蛋清粉中分离纯化溶菌酶的效果。结果表明:这两种材料都能够一步从蛋清粉中分离纯化得到溶菌酶,HPLC检测所得溶菌酶的纯度均为100%。用于溶菌酶分离后,胶原纤维固化金属离子吸附材料易于再生。胶原纤维固化铁固定床初次和再生后用于分离纯化溶菌酶时,得率分别为70.5%和70.0%;胶原纤维固化锆固定床初次和再生后用于分离纯化溶菌酶时,得率分别为68.7%和68.4%。研究了胶原纤维固化铁对细菌的吸附特性,包括温度、pH、菌龄、初始浓度和离子强度对吸附容量的影响,以及吸附等温线和吸附动力学。结果表明:该吸附材料对细菌具有很强的吸附能力,且吸附迅速。当大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)菌体浓度分别为1.02×107cfu/mL和9.8×106cfu/mL时,10分钟后胶原纤维固化铁对它们的吸附量分别为2.23×109cfu/g和2.72×109cfu/g,90分钟基本达到吸附平衡,吸附容量分别达到2.94×109cfu/g和3.15×109cfu/g。由于其吸附速度非常快,吸附有可能是在材料的表面进行。细菌的培养时间对平衡吸附量具有显著的影响,对处于生长期的细菌吸附能力最强。吸附容量随着离子强度的增加而增加。在pH4.0~10范围内均有较强的吸附作用;温度对平衡吸附量的影响不明显;其吸附平衡符合Freundlich方程。进一步研究表明,胶原纤维固化铁对细菌的吸附动力学可以用拟二级速度方程来描述,由该方程计算得到的平衡吸附量与实测值非常吻合,误差在2%以内。研究了胶原纤维固化锆对酵母细胞(S.cerevisiae)的吸附特性和吸附规律,包括温度、pH、菌龄、初始浓度和离子强度对吸附容量的影响,以及吸附等温线和吸附动力学,并研究了固定化酵母细胞连续发酵产乙醇的效果。结果表明:当酵母的起始浓度为5.26×105cfu/mL时,吸附量可以达到8.2×107cfu/g。当pH6.0时,胶原纤维固化锆对酵母细胞的吸附量最大。酵母的培养时间对吸附量的影响很大,对处于生长期的酵母吸附能力最强。而温度对吸附量的影响不大,其吸附平衡符合Freundlich方程。当溶液中NaCl的浓度大于0.1mol/L时,酵母细胞存活率降低,吸附量减少,溶液中NaCl的浓度小于0.1mol/L时,则影响不明显。胶原纤维固化锆对酵母的吸附较为迅速,5小时基本达到吸附平衡,且吸附动力学可用二级速度方程来描述。胶原纤维固化锆吸附固定化酿酒酵母能进行连续发酵,其发酵产乙醇的能力是游离酵母发酵能力的两倍。通过测定微生物细胞表面的接触角和Zeta-电位确定其表面的疏水性及电荷,探讨胶原纤维固化金属离子材料对微生物的吸附机理。由接触角计算微生物细胞表面自由能的结果可知,S.aureus、E.coli和S.cerevisiae三者的表面均具有亲水性,且都具有很强的给电子特性。其表面疏水性大小为:S.aureus>E.coli>S.cerevisiae,这个顺序与胶原纤维固化金属离子对三者的吸附容量结果一致,即微生物细胞表面的疏水性越强,则胶原纤维固化金属离子材料对其的吸附容量越大。这表明,微生物与胶原纤维固化金属离子之间存在疏水作用。Zeta—电位滴定结果表明:在pH4~12范围内这三种微生物细胞表面均带负电荷。在相同条件下,三者表面所带负电荷按从多到少的顺序为:S.aureus、E.coli、S.cerevisiae,这与胶原纤维固化金属离子材料对三者吸附容量的大小顺序一致,即微生物细胞表面所带负电荷越多,胶原纤维固化金属离子材料对其的吸附容量越大。这表明,微生物和胶原纤维固化金属材料之间极可能存在静电吸附。所以,微生物在胶原纤维固化金属离子材料上的吸附是疏水和静电共同作用的结果。本研究不仅为这类吸附材料在生物分离工程、医药、环保、生物发酵工程及化学工程等领域获得广泛应用奠定了基础,同时对丰富螯合金属亲和层析(IMAC)理论也具有一定的科学意义。
其他文献
热分解机理研究对于含能材料的安全性和库存可靠性评估具有重要意义。四嗪类高氮化合物是一种新型含能材料,它通过自身具有的高正生成焓获取能量,具有能量高、感度低、容易达
目的:提出导滞清热化湿法是治疗新加坡儿童食积的主要有效治疗大法,探讨加减保和汤治疗小儿食积的有效性和安全性。方法:按照《中医病证诊断疗效标准·中医儿科病证诊断疗效标准
[目的]探讨妊娠期糖尿病不同阶段护理的重要性以及护理的效果。[方法]对48例妊娠期糖尿病病人的治疗方法以及护理措施进行总结。[结果]在产妇分娩之后的3个月进行随访,其中42
[目的]探讨高职护理专业开设《护理人文》课程的实践及教学效果,以期进一步完善教学。[方法]自行设计调查问卷,调查197名护生对《护理人文》课程教学效果的评价及意见、建议
随着旅游业的发展,旅游业对气候与环境的影响日益得到社会的广泛关注。旅游业的碳排放问题逐渐成为旅游学术研究的又一热点。海南省的旅游业发展一直凭借其优美的环境而著称,
<正>卵巢癌是一种恶性程度很高的妇科肿瘤,发病率在妇科肿瘤中虽然不是最高,但由于其起病隐匿,80%以上的卵巢癌发病时已是晚期,病死率位列妇科肿瘤之首。女性到底该不该进行
<正>继2014年全国高校毕业生人数达到727万的历史峰值之后,2015届毕业生将达到750万。自从2009年国家提出把促进高校毕业生就业作为就业工作的重中之重以来,高校毕业生就业所
宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、妊娠滋养细胞肿瘤,阴道癌与外阴癌是女性发病率高的妇科癌症,且呈年轻化趋势。如何预防这几大癌症,怎么做到早发现、早诊断、早治疗,至关重要。
长客厂制造的SYZ25B空调双层硬座车共有5个车型,除一位端中层一位侧的布置有区别外,其余布置均相同。定员分别为176、180、182三种。该车使用寿命为25~30年。车体钢结构为非贯