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目的：构建抗菌肽2IQ3及其突变体的原核表达载体,纯化获得目的蛋白,并对目的蛋白进行抗菌活性的初步研究。方法：根据2IQ3氨基酸序列及大肠杆菌偏爱密码子原则,反推出其基因序列,加入肠激酶、EcoR I和HindⅢ酶切位点,引入终止密码TAG,并在两端加上3个保护碱基。按照常规基因工程技术方法将2IQ3目的基因与pET-28a(+)载体连接,获得2IQ3重组DNA分子,即pET-28a(+)-2IQ3。转化到DH5α宿主菌中,利用卡那霉素平板法进行筛选,获得阳性重组菌。经PCR方法鉴定,证实阳性重组菌中含有2I03目的基因,复制扩增获得大量的阳性重组菌。利用AP数据库采用PCR突变基因的方法将2IQ3基因序列中的A23T24、A32T33突变为CA、CA,其结果即用丙氨酸替代了1号和4号的天冬氨酸。用Premier5.0软件设计突变引物P1和P2,以之前获得的阳性重组菌中的质粒为模板,采用PCR方法获得突变基因(2IQ3m),以pET-28a (+)为表达载体、2IQ3m为目的基因片段,构建2IQ3m重组DNA分子；将其转化入BL21宿主菌内,利用卡那霉素平板筛选获得阳性重组菌,双酶切、PCR法鉴定,证实阳性重组菌中含有2IQ3m片段。复制扩增至菌对数生长期,加入ITPG诱导表达,按常规方法分离、提取融合蛋白；利用镍柱亲和层析方法纯化该融合蛋白,得到亲和层析纯融合蛋白,再用SDS-PAGE电泳法及紫外分光光度法对融合蛋白进行鉴定及浓度分析。以白色念珠菌为靶菌,两性霉素B为对照,利用体外液体生长抑制的方法检测抗白色念珠菌的活性。结果：根据2IQ3氨基酸序列对其进行设计和改造,获得突变体序列,利用AP数据库进行理化性质模拟对比分析：突变体在等电点、正电荷数、半衰期、疏水率、亲水性方面的性质均比母体要高,表明突变体有较强的抗菌活性。通过对突变体基因进行PCR扩增实验,获得大量的基因片段,进行连接、转化,阳性菌筛选鉴定,获得突变体重组DNA分子,经测序鉴定证实阳性重组菌中含有2103m片段。其产物经镍柱亲和层析处理后,测定重组蛋白的浓度为0.502mg/ml.最后进行体外抗菌活性检测,结果显示能抑制白色念珠菌的生长,表明2IQ3突变体有抗真菌的活性。结论：成功构建了抗菌肽2IQ3及其突变体基因的原核表达体系,并在大肠杆菌进行表达、纯化,其表达产物通过体外抑菌实验证明,重组蛋白能抑制白色念珠菌的生长,具有抗真菌活性的功能,但愿能成为一种新型的抗真菌药物。