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KHB为民间常用中药,具有解热、消肿、镇痛、抗炎等多种功效。近年来,随着KHB研究的深入,对其所含化学成分及药理活性有了一定认识,但对其水溶性成分组成及药理活性的研究还不多,本课题针对KHB水提醇沉抗乙肝有效部位化学成分及其活性进行了研究,为其新药开发奠定了基础。课题研究内容分为三部分:第一部分:(1)针对KHB抗乙肝有效部位化学成分进行系统化学检识,实验结果表明,该部位含有多糖、黄酮类成分、无机盐类成分以及少量的蛋白质、氨基酸类成分。(2)分别以葡萄糖及芹菜素为对照品建立了KHB抗乙肝有效部位中多糖和黄酮含量测定方法,测得其中糖类成分约占20%,黄酮类成分约占9%,无机盐类成分约占6.8%,氨基酸类成分约占2%。第二部分:(1)应用BIAcore生物大分子相互作用仪,对KHB抗乙肝有效部位进行了药理活性筛选。KHB抗乙肝有效部位经过TOYOPEARL HW-40C凝胶柱层析分离纯化得到KHB-1、KHB-2、KHB-3组分。各组分通过BIAcore生物大分子相互作用仪进行活性筛选,发现与乙肝表面抗原结合活性成分集中于KHB-1组分,KHB-1组分再经DEAE-52离子交换柱层析分离,得到KHB-A、KHB-B、KHB-C、KHB-D、KHB-E组分。各组分再经过BIAcore生物大分子相互作用仪进行活性筛选得到3个活性较高组分(KHB-C、KHB-D、KHB-E),其中KHB-E组分较有效部位与乙肝表面抗原结合强度提升7.4倍。(2)组分KHB-2经过分离纯化,得到其中含量较高的单体化学成分,经IR和与对照品对照,鉴定该单体化合物为草酸钠。第三部分:本文以多糖为指标性成分,优化了KHB抗乙肝有效部位提取工艺和纯化工艺。(1)以多糖为指标性成分,通过单因素实验和正交实验优化了提取工艺,确定了最佳提取纯化工艺为KHB饮片,加15倍量水,在60℃条件下提取90min。(2)以多糖为指标性成分,比较了大孔吸附树脂和醇沉两种纯化工艺效果,优化了醇沉乙醇浓度梯度参数,确定了纯化工艺为提取液减压浓缩至相对密度为1.16-1.18(80℃),加95%乙醇使含醇量达到85%,沉降8-10h,滤取沉淀,挥去乙醇,减压干燥,即得有效部位。