天然雌激素降解菌的筛选鉴定及其降解特性研究

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近年来环境雌激素的污染逐渐引起国内外学者的关注,并开始对其在环境中的污染水平及其生物降解特性等进行探讨。本文从厦门湾、筼筜湖及厦门某污水处理厂活性污泥中驯化、分离得到19株降解17β-雌二醇(E2)的好氧菌株,其中5株可以降解E1,一株为交替赤杆菌属新种,为含环境激素类废水的生物强化处理提供了新菌株材料。本文通过查阅相关文献归纳了E2的降解途径,考察了降解菌株对雌酮(E1)雌三醇(E3)、睾酮(T)和苯酚的降解性能,并推测了T的降解途径,比较了降解菌和已报道的E2降解菌株KC8对E2的降解效果,同时考察了KC8两株模式菌株对E2的降解性能。主要结论如下:1.本实验成功地从活性污泥和咸水湖中筛选出19株能降解E2的菌株。其中从咸水湖中分离得到的菌株MH-B为交替赤杆菌属新菌种,查阅相关文献,少有海水中分离到的雌激素降解菌,只有熊光明等从波罗的海分离到一株E2降解新菌H5(未鉴定),所以本实验分离到的菌株MH-B是目前报道的第一株鉴定的海水雌激素降解菌。2.测定了AX-B、AHC-F、AHC等菌株的分离地点某污水厂中各工艺的3种天然雌激素含量,结果表明该污水厂中3种天然雌激素的含量较高,E1、E2、E3进水浓度分别为835.55n/L、222.86n/L和556.30n/L;出水浓度分别为693.13ng/L、138.6n/L8和141.16n/L。查看了菌株MH-B分离环境筼筜湖和厦门湾中这3种雌激素含量,半数以上采样点都检测到雌激素,浓度范围E1在<LOD12ng/L之间,E2在<LOD-4.0n/L之间,E3在<LOD-3.On/L之间,表明这两处区域已经受到天然雌激素污染,天然雌激素对该水域生物的影响值得关注。3.分析菌株MH-B、AX-B、AHC-F、AHC-A对E2的降解实验,发现菌株MH-B、AX-B、AHC-F能完全降解E2及其初步降解产物E1,而菌株AHC-A只能将E2脱氢氧化生成E1,不能将E1进一步降解,由此把降解菌分为两种降解模式,降解模式I:可以把E2降解为雌激素活性比较低的E1,但在研究时间内却无法继续降解E1,菌株AHC-A及其它只能把E2降解成E1的菌属于这一降解模式;降解模式II:菌株将E2完全降解后,又可以较快地降解E2的最初代谢产物E1,菌株MH-B、AX-B、AHC-F及分离的另外两株菌AH-E和AH-A属于这一降解模式。4.在E2降解实验中,菌株MH-B、AX-B、AHC-F均可以在8h内将100m1、2mg/L的E2完全降解。在以E1为唯一碳源的生长实验中,菌株MH-B在6d内对E1的降解率达到最高但不能将E1完全降解;菌株AHC-F在22d内将E1完全降解。5.菌株MH-B生长温度范围为4℃—40℃,最适温度为35℃-40℃;生长pH值范围为4.5—10.0,最适PH值为7.5;生长盐度范围为0—7%,最适盐度为1%。6.利用LC-MS分析T降解产物,推测T降解途径:T经过一系列生物催化反应,首先生成去氢睾酮(DHT)和雄烯二酮(AD),然后,DHT和AD都转化成1,4雄烯二酮(ADD),之后生成9α一羟基—1,4雄烯二酮(9α-OH-ADD),再经过一系列的反应,最后降解生成CO2和水。7.分析菌MH-B、AX-B、AHC-F、AHC-A对E2、E3、T、EE2和苯酚降解实验,结论如下:菌AX-B和AHC-F可以降解E1、E2、E3、T、和苯酚,MH-B可以降解E1、E2、E3和T但不能降解苯酚,AHC-A可以将E2、T初步降解,不可以降解E1、E3、苯酚,四株菌否不能降解EE2。
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