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鼻咽癌是头颈部最常见的恶性肿瘤,在我国南方地区发病率较高,严重危害着人民群众的身体健康。化学治疗是临床治疗鼻咽癌的重要手段之一,但肿瘤细胞多药耐药性的产生又往往导致患者化疗的失败。因此,深入研究肿瘤多药耐药机制,寻找多药耐药逆转剂,提高肿瘤化疗疗效,已成为当前肿瘤研究领域中的热点之一。多年来,一些在体外具有逆转肿瘤多药耐药活性的化合物陆续被发现,但多数在临床试验中存在较大毒副作用,被限制了在临床上的应用。千金藤素作为一种双苄基异喹啉类生物碱单体化合物,主要由防己科千金藤属植物的块茎中提取分离而得,多年的研究应用已证实其具有较为广泛的生物活性及较低的毒副作用。近年来有学者发现,千金藤素可逆转白血病、乳腺癌、肝癌等多种肿瘤的多药耐药性,但其对鼻咽癌的多药耐药性是否具有潜在的逆转作用及相关机制,目前国内尚无报道。因此,本研究在构建鼻咽癌多药耐药细胞模型CNE2/ADM的基础上,探讨千金藤素对鼻咽癌多药耐药的逆转作用及可能的逆转机制。目的建立人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM并研究其生物学特性,研究千金藤素(cepharanthine,CEP)对人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM耐药性的逆转作用及可能的逆转机制。材料与方法(1)采用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增法,诱导人鼻咽癌细胞CNE2,建立多药耐药细胞株CNE2/ADM。通过观察细胞形态学变化,药物敏感性试验,测定生长曲线、群体倍增时间、细胞周期分布及P-糖蛋白(p-glycoprotein,P-gp)功能和表达变化,评价CNE2/ADM的生物学特性。(2)MTT法测定千金藤素对CNE2/ADM细胞耐药性的逆转作用,Rho123蓄积试验测定千金藤素对CNE2/ADM细胞中P-gp功能的影响,Western blot法测定千金藤素对CNE2/ADM细胞中P-gp表达的影响。结果(1)历时6个月,建立了人鼻咽癌耐药细胞株CNE2/ADM,耐药指数为12.98,并对顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物有不同程度的交叉耐药性;CNE2/ADM细胞异形明显,增殖速度减慢,群体倍增时间延长(P<0.05),G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少(P<0.05);CNE2/ADM细胞中P-gp的药物泵出功能增强,P-gp的表达水平升高。(2)千金藤素能逆转CNE2/ADM细胞对阿霉素的耐药性,2、4、8nmol/m L的千金藤素对CNE2/ADM细胞阿霉素耐药的逆转倍数分别为1.49、2.16、3.19,并呈现浓度依赖效应(P<0.05);千金藤素可浓度依赖性的促进CNE2/ADM细胞内Rho123的蓄积,抑制P-gp的药物泵出功能;千金藤素可抑制CNE/ADM细胞中P-gp的表达,这种抑制作用具有浓度和时间依赖性。结论(1)成功建立了人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM,其具有典型的多药耐药特性,可作为进一步研究鼻咽癌多药耐药机制及筛选多药耐药逆转剂较为理想的细胞模型。(2)千金藤素能逆转CNE2/ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转耐药的机制可能与抑制CNE2/ADM细胞中P-gp的功能和表达有关。