嗜水气单胞菌外膜提取物及胞外产物特性的分析

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:echo1108
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
对六株嗜水气单胞菌(二株分离自中国鲤科鱼类、二株分离自中国的中华绒螯蟹、一株来自孟加拉国的鱼类、一株来自英国国家工业与海洋菌种收集中心(NCBIM)虹鳟鱼的标准菌株)的全细胞、外膜提取物和胞外产物(ECP)在不同的培养条件下进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫转印(Western blotting)分析。所用培养基共五种,分别为:(1)胰胨大豆胨肉汤(TSB);(2)缺铁TSB;(3)补铁TSB;(4)加鱼血清TSB;(5)英国水产疫苗公司提供的AVL培养基。 结果发现: 全细胞蛋白质电泳图谱:6株菌株在同一培养条件下全细胞的蛋白质电泳图谱是不一样的,同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但不完全一致。 盐酸胍细菌外膜提取物的图谱特征:6株菌株在同一培养条件下的盐酸胍细菌外膜提取物的蛋白质电泳图谱是不一样的,同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但不完全一样。但所有的图谱具有相同分子量的条带,分别为34kDa和30kDa。用Schiff’s试剂,银染及凝集素标记(BS-1,ConA,UEA-1)法测定及分析提取物中碳水化合物的特征,发现凝集素标记及经蛋白酶k处理后的所有菌株的提取物均含有不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子量的条带,其中32kDa条带被三种凝集素及银染所显示,而34kDa条带仅被BS-1和UEA-1所识别。而经Schiff’s试剂染色后,仅出现少量的条带。 胞外产物(ECP)的特性分析:ECP的蛋白质电泳图谱显示,所有菌株具有不同的蛋白质图谱,但具有35kDa相同分子量的条带,而相同的菌株在 0不同的培养条什下具相似的图谱。不同的菌株在不同的培养条件下上清液中蛋白质含量是不一样的,每毫升上清液中蛋白质含量为l听mg。用底物惭叼匕泳沦测定了**P的蛋白酶活性,所川的底物为u胶 酪蛋白。商品的牛血红蛋白及新鲜的鱼血红蛋白。所有菌株的**P在明胶和酪蛋臼底物电泳凝胶上具有清晰的条带,而在血红蛋白凝胶上仅出现少量条卅。经银染测定及分析**P中碳水化合物的特征,发现经蛋白酶k处理后所有菌株的ECP均有不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子量 3 5 kDa条带。经 Schiff’s试剂染色,在 ECP凝胶上没有显示任何条带。细菌外膜提取物与胞外产物的免疫原性:用免疫转印法(Western blotting)测定菌体外膜提取物和 ECP的抗原性。结果显示,提取物有多条不同的条份被两#11。咖.清所识别,且用活菌制备的血清比死菌的要强得多。所有菌株在不同培养条件下的外膜提取物均具 3 5 kDa条带被鱼血清所识别。所有菌株在不同培养条件-厂的 ECP也均具 3 5 ica条带被鱼血清所识别,卅测 3 5 kDa条俗是l嗜水气单胞菌的共同抗原。经蛋白酶 k处理的 ECP,35k*。条带消矢,说明这条带是山蛋白质组成的。同时,用**A tL进行了菌株与鱼血清间的交叉反应。罗非鱼注射活菌T4二周及四周后,鱼体内抗休的效价及鱼血清与其它5株菌的交叉反应。活菌注射鱼体内二周及四周时,迄血清。。I。抗活菌*4抗体的效价分别为1:引2,1:8192,而四周时,抗火活菌的抗体效价为1:1024,负血清与其它5株活菌的交叉反J。V山很w烈多J)’L仲的 淌以丫!H从 l:slZ到 1:10240
其他文献
为了验证NRC(1998)生长模型对我国瘦肉型仔猪的适用性,确定长×荣杂交仔猪的氨基酸需要量。本试验选用10~20kg不同性别长×荣杂交猪30头猪,等分为6组,3组公猪、3组母猪,参照NRC(1998)
氟苯尼考是一种新型的畜禽专用抗菌药,对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均有很好的抗菌活性,为将氟苯尼考应用于羊细菌病的防治,该文成功地研制了30﹪氟苯尼考注射液.经试验确定,紫
本研究旨在研究高精料日粮饲喂对奶山羊肝脏中游离氨基酸重分配及乳产量和乳蛋白的影响与相关机制。研究包括以下三个方面的主要内容:1高精料日粮对干奶期奶山羊肝脏中游离氨
新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的具有高度传染性的家禽传染病,给世界各国的养禽业带来严重的经济损失。随着NDV疫苗的广泛应用,ND的流行虽得到控制,但是其流行趋势却在发生变化
第一章综述 1.1单细胞凝胶电泳技术 单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresisassay,SCGE)义称彗星试验(cometassay),是一种快速、灵敏的检测单个细胞DNA断裂的技术,
为了降低乙醇和6-DMAP对卵母细胞的有害作用,制定良好的卵母细胞激活方案,该实验研究了乙醇结合6-DMAP提高小鼠卵母细胞孤雌激活率、6-DMAP作用的时间窗口以及6-DMAP对孤雌胚