论文部分内容阅读
目的:基于转录水平,现在公认的胶质母细胞瘤分子分型包括三种,分别是经典型,间质型和前神经元型。这三种类型的病人呈现明显的生存差异。本课题计划通过生物信息学分析结合实验研究寻找生存率较低的两个亚型-经典型和间质型的生物标记物,并探索靶向治疗。方法:1.EGFR是胶质母细胞瘤经典亚型的分类标记,首先对CGGA信使RNA和非编码RNA测序结果进行分析,然后寻找经典型胶质母细胞瘤的保护性mi RNA,验证该分子在经典型胶质母细胞瘤发生发展中的作用以及和EGFR关联的机制,包括表型分析:Transwell实验,平板克隆实验,CCK8实验,细胞周期实验。Chi P实验验证EGFR通路激活下mi RNA启动子区的组蛋白修饰情况。q PCR,Western blots和双荧光素酶报告实验验证mi RNA下游靶基因。靶基因通路激活情况的验证。2.通过RNA测序细胞和肿瘤组织进行分子分型。我们使用co-IP和免疫荧光来鉴定RUNX1转录蛋白复合物的成员。通过生物信息学分析,Ch IP和荧光素酶报告实验用于验证靶基因。TCGA和CGGA的分析证实了与RUNX1靶基因相关的表达水平和预后。病人来源的异种肿瘤移植实验研究和体外功能研究证实了RUNX1对GBM发生和发展的影响。结果:1.我们发现mi R-524-3p和mi R-524-5p在来自CGGA数据库的经典分子亚型胶质母细胞瘤(GBM)中被抑制,并且该分子与EGFR过表达和EGFRv III突变效应呈现负相关。这两种mi RNA改善了胶质瘤患者的总生存时间,并且它们的过表达可以抑制胶质瘤细胞迁移,增殖和细胞周期,并控制体内肿瘤的形成。有趣的是,两种mi RNA一起对胶质瘤细胞具有协同抑制作用。此外,我们证实EGFR扩增/EGFRv III突变可通过组蛋白修饰的方式抑制Pri-mi R-524的转录形成。Mi R-524-3p和mi R-524-5p分别通过靶向Smad2,Hes1和Tead1抑制TGF/β,Notch和Hippo通路。这些通路抑制了它们共同的下游转录因子C-myc。更有趣的是,C-myc与EGFR/EGFRv III的启动子区域结合并激活其转录。2.RUNX1的转录本和蛋白质表达在Mes胶质母细胞瘤细胞系、组织和患者中上调,并且在体内和体外以TGFβ通路依赖性方式促进胶质母细胞瘤的增殖和侵袭。RUNX1/p-Smad3/SUV39H1转录蛋白复合物在TGFβ通路激活后紧密联系。我们发现并证实了BCL3,MGP和POSTN被p-Smad3/RUNX1转录激活,而MXI1被RUNX1/SUV39H1-H3K9me3轴转录抑制。我们的研究发现Mes胶质母细胞瘤呈现高水平的TGFβ通路激活和RUNX1蛋白表达,并且激活的TGFβ通路促进了RUNX1/p-Smad3/SUV39H1转录蛋白复合物的形成并影响下游基因的表达(BCL3,MGP,POSTN和MXI1)。结论:我们的实验发现表明了mi R-524介导EGFR/EGFRv III激活作用。RUNX1形成的转录激活轴维持了胶质母细胞瘤间质亚型。它们分别可以作为胶质母细胞瘤经典亚型和间质亚型的治疗药物和特异性生物标志物。