论文部分内容阅读
目的：探索雷帕霉素促急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞存活的作用机制。 方法：采用健康成年Fischer344大鼠，8-12周龄，共36只。前房灌注生理盐水法建立急性高眼压动物模型，于术中维持75mmHg眼压2小时。分别设组如下：正常眼组、对照组（DMSO）、雷帕霉素组、脑源性神经营养因子（Brain-Derived Neurotrophic Factor BDNF）组、BDNF联合雷帕霉素组，分别于急性高眼压3天后玻璃体腔注射相关药物，6h后取各组视网膜组织进行western blot。分别探测 p70S6K、pAKT(ser473)、pERK、PTEN四个靶蛋白，其中p70S6K是雷帕霉素发挥抑制mTORC1药理作用的观察指标，pAKT(ser473)、pERK蛋白是pS6K-IRS1-PI3K-pERK这一负反馈通路的观察指标。最后通过对可能发生变化的靶蛋白pERK、PTEN进行抑制或激活，取视网膜组织进行铺片免疫组化再次评估视网膜神经节细胞的数目，进一步确认相关作用机制。数据分析多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Bonferroni检验。抑制pERK后两样本比较采用独立样本T检验。 结果：（1）急性高眼压诱导后，与正常眼相比，p70S6K蛋白含量下降（**p<0.01），而眼内注射雷帕霉素以及联合药物后与对照组（DMSO）比较p70S6K蛋白含量明显减少（**p<0.01），即雷帕霉素可抑制mTORC1活性。（2）急性高眼压诱导并注射相关药物后，雷帕霉素组和联合用药组可提高pAKT(ser473)蛋白含量（*p<0.05），BDNF组pAKT(ser473)蛋白也增加。p70s6k、pAKT(ser473)的变化同时反映p70S6K-IRS1-PI3K负反馈信号通路减弱。（3）雷帕霉素组和联合用药组可显著增加pERK蛋白的活性（**p<0.01）。（4）通过进一步抑制pERK(U0126)，我们发现U0126可明显减少雷帕霉素促视网膜神经节细胞存活的作用（雷帕霉素+U0126组细胞数841±56/mm2 VS雷帕霉素组1622±98/mm2，**p<0.01）。（5）雷帕霉素组和联合用药组对PTEN蛋白含量无明显改变。 结论：（1）急性高眼压大鼠模型中，眼内注射雷帕霉素可通过减弱一条pS6K-IRS1-PI3K负反馈通路并介导BDNF通过pERK信号通路发挥视神经保护作用。 （2）雷帕霉素对PTEN信号通路无明显直接影响。