落叶松抗旱相关基因分子标记的筛选与克隆

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落叶松是具有重要经济和生态价值的树种,它多分布于寒冷和高山地带,具有较高的抗旱能力。目前,国内外对落叶松的研究主要集中在分子系统学方面。已报道的基因数相对较少,大部分为ribosomal RNA基因序列。因此通过分子生物学手段研究落叶松抗旱相关基因及分子标记具有重要的理论意义和应用价值。   本论文主要从两方面进行了研究:   1.落叶松高生根能力相关基因的分子标记研究   本研究以生根率为依据,分别选取日本落叶松(Larix kaempferi)×长白落叶松(Larix olgensis)四组杂交组合(日永85×长白11,日永85×长混,日永85×长白4C,日永85×长白27)为试材,结合集群分离分析法(BSA),随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术,特征序列扩增区域(SCAR)技术及简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)分子标记,首次对落叶松高生根能力相关基因分子标记进行研究。利用368个RAPD引物,筛选到一个高生根能力相关基因的分子标记S356445,并成功的将该标记转换为SCAR标记—HRL445。同时利用30个ISSR技术筛选到4个新标记,分别为:LARI-1,LARI-2,LARI-3,LARl-4。本研究为利用分子标记技术辅助高生根能力落叶松育种,加快育种进程提供了新的技术途径。   2.落叶松脱水素基因同源序列的克隆   鉴于脱水素在干旱过程中对植物起到重要的的保护作用,本研究采用同源克隆的策略设计脱水素基因兼并引物,应用PCR方法获得了3条来自基因组DNA的序列(LDhn1D-3D)和3条来自cDNA的序列(LDhn1C-3C)。对这些序列进行多种生物信息学分析,初步确定此六条序列为落叶松脱水素基因家族的不同基因片段,同时构建了松科八种植物脱水素基因进化树。本研究工作为研究脱水素基因在落叶松中的分布及在抗旱中的作用奠定了基础。
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