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胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,肿瘤的形成以及恶变,是一个涉及多种癌基因和抑癌基因参与作用的复杂病理过程。TFF3是三叶因子家族成员之一,是一种小分子粘膜分泌蛋白,其与胃癌的关系以及在粘膜上皮细胞中的重建作用已经成为大家关心和研究的热点之一。hnRNPA1在RNA调节中的作用及其在细胞凋亡和增殖等肿瘤发生、发展机制中的作用,表明其与肿瘤的形成和发展息息相关。本实验首次在胃癌细胞系BGC823中探讨TFF3与hnRNPA1肿瘤细胞生物学功能的影响,并进行二者结合性的初步探讨。
本实验通过构建Myc-hnRNPA1及Flag-TFF3的质粒,利用免疫荧光和免疫荧光共聚焦技术探索二者在HEK-293T细胞中的共定位。其次构建hnRNPA1和TFF3的干扰质粒,并稳定转染BGC-823细胞,并应用Western blot检验干扰hnRNPA1的蛋白表达情况和应用PCR检测TFF3的mRNA干扰表达情况;并进一步应用划痕实验、CCK-8、Transwell小室实验及流式技术分析hnRNPA1及TFF3稳转干扰细胞株的迁移、增殖、侵袭能力及凋亡水平的变化,由此考查hnRNPA1及TFF3在肿瘤细胞中的生物学作用。
通过上述实验,我们发现,TFF3和hnRNPA1的免疫荧光和免疫荧光共聚焦具有明显的共定位一致性,同时hnRNPA1基因沉默能够明显抑制BGC-823细胞的迁移能力、生长活性、侵袭能力,凋亡水平,同时TFF3基因沉默能够明显抑制BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并降低肿瘤细胞的凋亡水平。结合二者共聚焦实验的明显结和性,这些结论不仅明确了TFF3和hnRNPA1在胃癌细胞株BGC-823中的生物学功能,而且第一次初步探讨了TFF3和hnRNPA1的相互作用性,从而为胃癌的治疗提供新的靶点。