目的:通过观察益气清化方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠黏膜封闭蛋白-1(Claudin-1)和血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的表达影响,初步探讨其治疗IBS-D的机制,为临床治疗提供新思路。方法:选用48只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、益气清化方组、美常安组,每组12只,所有大鼠适应性饲养1周,除正常组外,其余组乙酸灌肠结合束缚应激造模,造模成功后,各组大鼠分别予生理盐水和不同药物灌胃14天,每天1次。灌胃治疗结束后,抽取腹主动脉血离心后检测血清TNF-α浓度,取结肠黏膜组织进行HE染色、免疫组化,并使用Western Blot法观察Claudin-1蛋白的表达情况。结果:1.模型评价:除正常组外,模型组大鼠毛色欠光泽,活动量减少、蜷缩、扎堆、食欲减退、反应迟缓,大便变软不成形,肛门部有粪便污物附着等。体重增长缓慢(P<0.01),粪便含水量增多(P<0.01),粪便性状评分升高(P<0.01),病理切片提示各组大鼠结肠黏膜完整,未见间质充血、水肿,偶见炎性细胞浸润,各组未见明显差异,表示造模成功。2.IBS-D模型大鼠远端结肠组织Claudin-1蛋白的表达变化:结肠黏膜免疫组化结果:模型组大鼠结肠黏膜Claudin-1蛋白染色分布不均、褪色,蛋白表达较正常组下降,益气清化方组及美常安组Claudin-1蛋白表达在治疗后较模型组上升。Western Blot分析结果提示:模型组、益气清化方组、美常安组大鼠结肠黏膜Claudin-1蛋白表达的OD值均下降,低于正常组,差异有统计学意义(P<0.001)。治疗后,益气清化方组、美常安组大鼠结肠黏膜Claudin-1蛋白的表达比模型组升高,在统计学上有意义(P<0.01,P<0.05)。3.IBS-D模型大鼠外周血TNF-α浓度变化:IBS-D模型大鼠外周血TNF-α浓度对比正常组明显升高(P<0.001),统计学上有明显差异。治疗后,益气清化方组、美常安组大鼠血清TNF-α浓度均比模型下降(P<0.01,P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05,P<0.01),有统计学意义。结论:1.用乙酸灌肠结合束缚应激成功建立IBS-D大鼠模型。2.IBS-D模型大鼠结肠黏膜Claudin-1表达下降、血清TNF-α浓度升高,提示Claudin-1蛋白的表达及TNF-α的浓度可能参与了 IBS-D的发病过程。3.益气清化方可以上调结肠黏膜Claudin-1表达水平,降低血清中TNF-α浓度,从而达到治疗的作用。4.益气清化方治疗IBS-D的机制可能是通过修复肠道黏膜屏障,降低炎症反应来发挥作用。