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目的探讨Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在儿童肝母细胞瘤的表达以及化疗对瘤细胞YAP1表达的影响,检测YAP1基因的扩增状况;统计学分析YAP1在瘤细胞核的表达与患者预后的相关性;体外实验分别观察siRNA下调YAP1表达、靶向抑制剂-维替泊芬(Verteporfin,VP)对肝母细胞瘤细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法本实验分为两部分:1.YAP1在肝母细胞瘤中的表达及其与患者预后的相关性分析采用免疫组化染色检测YAP1和β-连环蛋白(β-catenin)在38例儿童肝母细胞瘤和瘤旁组织中的表达;观察YAP1在48例化疗后手术切除肝母细胞瘤的表达;并对比检测YAP1蛋白在11例肿瘤穿刺活检组织以及化疗后手术切除肿瘤组织的表达,采用FISH检测YAP1基因扩增状况;统计分析YAP1在瘤细胞核的表达与患者预后的相关性。2.siRNA转染下调YAP1表达及维替泊芬靶向抑制YAP1对肝母细胞瘤HepG2细胞增殖和凋亡的影响通过体外细胞培养实验将YAP1 siRNA转染HepG2细胞48h后,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白印迹法(western blot)检测YAP1mRNA和蛋白水平的变化,流式细胞术检测HepG2细胞增殖水平和凋亡率;采用维替泊芬靶向抑制YAP1 48h后,经流式细胞术检测HepG2细胞增殖和凋亡状况。结果1.YAP1在未化疗的肝母细胞瘤细胞核阳性表达率为50.00%(19/38),瘤旁肝组织无表达0.00%(0/21)(χ~2=15.49,P<0.01),且其表达水平与患者的预后呈负相关。YAP1在化疗后的肝母细胞瘤细胞核的阳性表达率为70.83%(34/48),明显高于未化疗的肝母细胞瘤(χ~2=3.893,P<0.05)。对比观察11例患者化疗前、后瘤细胞核的YAP1表达,化疗后的肝母细胞瘤细胞核YAP1表达量明显升高(t=12.251,P<0.01),但化疗前、后的肝母细胞瘤经FISH检测均未见YAP1基因扩增。β-catenin在肝母细胞瘤的细胞核阳性表达率为52.63%(20/38),瘤旁肝组织不表达0.00%(0/21)(χ~2=16.72,P<0.01),统计分析结果显示肿瘤细胞的YAP1表达与β-catenin呈正相关。2.转染YAP1siRNA 48h后,HepG2细胞YAP1的mRNA及蛋白表达显著低于空白对照组,瘤细胞增殖能力下降,凋亡率增高。采用维替泊芬靶向抑制YAP1 48h后,HepG2细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.01),且细胞凋亡率高于对照组(P<0.01)。结论YAP1在50%的儿童肝母细胞瘤病例瘤细胞浆和细胞核中表达,而且化疗后的病例YAP1在瘤细胞核内表达水平明显增高。肝母细胞瘤化疗前、后瘤细胞均未见YAP1基因扩增。肝母细胞瘤细胞核表达YAP1与患儿的预后呈统计学负相关。YAP1可能与β-catenin协同促进肝母细胞瘤的生长。采用siRNA下调YAP1表达以及维替泊芬靶向抑制YAP1均使肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖受到抑制、凋亡率增高。因此,YAP1可做为儿童肝母细胞瘤治疗的新靶点,维替泊芬或将成为潜在的备选药物。