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尖孢镰刀菌(Fusariumo xysporum)是一种世界性分布的重要植物病原真菌,寄主范围广泛,可引起100多种植物的维管束萎蔫病害。构建表达载体质粒,进行尖孢镰刀菌的遗传转化,对所转化的尖孢镰刀菌进行生物化学与分子生物学检测,这对于了解尖孢镰刀菌的致病机理具有重要意义,为进行进一步的生防研究奠定基础。限制酶介导整合转化(restriction enzyme-mediated integration,REMI)的方法由于其操作简单,转化效率高,单拷贝整合多,正被越来越多地应用于丝状真菌的遗传转化。本研究较系统地对尖孢镰刀菌的REMI转化体系进行了摸索和优化,并对部分转化子的表型进行了初步的分析,建立起了一套完整、有效的尖孢镰刀菌遗传转化体系,主要结果如下:1、掌握尖孢镰刀菌菌丝的培养条件,分生孢子的获得及转化前分生孢子的再培养。为了获得幼嫩的菌丝,分生孢子进行再培养时以50mL的PD培养基中加入107个左右的孢子为宜,培养温度和摇床转速分别为28℃和80r/min,培养时间为10～12h。2、尖孢镰刀菌原生质体的制备是整个转化中最关键的一步,酶解得到的原生质体的数量和质量直接影响到转化的效果。通过实验发现,把溶壁酶配置成2%的浓度,酶解尖孢镰刀菌菌丝的细胞壁时以32℃的温度,摇床轻轻晃动3h左右可获得大量的高质量原生质体。3、分别提取原始尖孢镰刀菌和转化子的基因组DNA,经过18S rDNA基因序列测定,证明了转化前后的菌株为尖孢镰刀菌。设计特定的引物扩增潮霉素基因片段,原始的尖孢镰刀菌无潮霉素基因片段,而三个转化子均扩出了潮霉素基因片段。4、转化子表型分析发现,同样的培养条件下三个转化子及原始尖孢镰刀菌的产孢量分别为1.19×104个/mL、0.48×104个/mL、0.59×104个/mL、2.63×104个/mL,三个转化子的产孢量比原始尖孢镰刀菌少,但生长速度确比原始尖孢镰刀菌快。5、三个转化子及原始尖孢镰刀菌分别回接甜瓜盆栽苗,10d后回接的甜瓜盆栽苗均发病,其中转化子L128-T1回接的盆栽苗每株中只有少数叶片开始变黄,发病速度慢,而清水处理的盆栽苗无发病现象。