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研究背景：原发性肝癌是一种全球高发、恶性程度很高、易转移复发的恶性肿瘤。复发和转移是造成大部分肝癌患者死亡的原因。目前仍无特效的诊断与治疗肝癌的手段。究其原因在于对肝癌的发生与发展机制的认识不足。与其它肿瘤相似，肝癌的发生与发展的分子机制十分复杂，除了可能的外部因素外，内部基因的表达与调控对其发生起着决定性作用。除了基因本身的突变，一系列调控因素诸如表观遗传学调节也能影响到目的基因的表达。NEDD9是一个与发育相关的基因，在细胞的增殖与发育中起着重要作用。但是具体作用机制目前不明，尤其是在原发性肝癌中的作用亟需研究。研究目的:在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中利用过表达NEDD9、合成shRNA抑制NEDD9的表达，使之形成NEDD9的过表达和低表达的表型，观察转染后的肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外迁移和增殖能力的变化。利用E.coli表达NEDD9与GST的融合表达蛋白，以体外的pull-down试验，获取与NEDD9相互作用的蛋白，以质谱鉴定。研究方法：1.提取肝癌细胞系SMMC-7721细胞总RNA，利用RT-PCR的方法检测NEDD9的mRNA表达。2.利用IPTG诱导表达NEDD9及几段功能结构域（N甲、N乙）在原核细胞中蛋白的表达，期望纯化蛋白做深入研究。3.构建NEDD9的真核表达质粒，并基于软件选择NEDD9的干扰位点，设计合成shRNA，分别转染肝癌细胞系SMMC-7721细胞，观察转染后的肝癌细胞体外迁移和增殖能力的改变。4.利用划痕实验检测转染的NEDD9过表达和低表达肝癌细胞体外迁移能力的改变。5.通过细胞计数法检测转染的NEDD9过表达和低表达肝癌细胞增殖能力的改变。⒍通过MTS法检测转染的NEDD9过表达和低表达肝癌细胞凋亡的改变。实验结果：1.利用RT-PCR的方法检测了肝癌细胞系SMMC-7721中NEDD9的表达，结果显示NEDD9在肝癌细胞系中表达。2.成功构建了NEDD9在pcDNA3.1中的过表达载体，并转染肝癌细胞系SMMC-7721细胞，利用RT-PCR的方法检测到NEDD9在SMMC-7721细胞中过表达。3.将合成的shRNA转染肝癌细胞系SMMC-7721细胞，利用RT-PCR的方法检测其在mRNA水平的变化,发现其能明显降低肝癌细胞中NEDD9的表达。4.在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中，抑制NEDD9的表达，可抑制细胞的体外迁移能力。合成的shRNA转染肝癌细胞系，检测到细胞的迁移能力降低。5.抑制肝癌细胞系SMMC-7721中NEDD9的表达可以减缓肝癌细胞的增殖。同上，过表达载体转染SMMC-7721细胞后，首先鉴定NEDD9的表达水平升高程度，然后利用活细胞计数法发现肝癌细胞的增殖能力增强。6.确定NEDD9的表达水平抑制后，利用MTS试验检测到细胞的凋亡增强。结论：本研究提示NEDD9在肝癌细胞系中表达，抑制NEDD9的表达可降低SMMC-7721细胞的增殖与迁移能力。通过体外实验显示NEDD9在肝癌的增殖和转移中可能发挥一定作用，尤其是在促进细胞迁移方面，有望成为一个诊断肝癌转移的预警分子。