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前列腺特异性抗原;前列腺癌;良性前列腺增生;"夹心"ELISA;表位分析文摘： 前列腺特异性抗原是前列腺癌最有效的标记物,临床上将血清PSA水平用于甑别恶性前列腺肿瘤和良性前列腺增生症. 该研究基于血清PSA水平的免疫分析方法,以前列腺特异性抗原为免疫原,通过杂交瘤技术制备、筛选特异单克隆抗体细胞株,共获得68株能稳定分泌抗体的细胞株,其中62株细胞分泌的抗体亚类为IgG1类,2株为IgG2a类,4株为IgG2b类;67株细胞分泌的抗体轻链型为κ型,1株为λ型.采用rProtein A一步亲和层析法纯化了20株杂交瘤制备的腹水粗品抗体,纯品抗体经鉴定后,抗体分子量在149.39kD~158.02kD,抗体纯度达97％以上,抗体亲和常数为0.242μg/L~302.0μg/L.20个纯品抗体与相同摩尔浓度包被的t-PSA、f-PSA、PSA-ACT反应后证实,PSA-ACT/f-PSA比值在24.9%~103.0%范围内,抗体与PSA的结合位点包括:(1)同时识别PSA-ACT和f-PSA,即t-PSA的抗体;(2)识别PSA分子与ACT分子间相邻构象形成的位点.选择同时识别PSA-ACT和f-PSA的12个纯品抗体进行生物素化标记,并采用"夹心"法ELISA分析特异抗体识别前列腺特异性抗原的抗原表位.研究表明,12个抗体主要识别6个抗原表位,分为6簇:(1)1D4、1E8和6C4抗体;(2)4A11、5H9和16E5抗体;(3)6H4、9C10和9G12抗体;(4)4E2抗体;(5)8E9抗体;(6)3G6抗体.经过对识别-PSSA不同抗原表位的抗体筛选和优化,采用"夹心"酶联免疫吸附检测法分析了3对抗体建立的检测体系对相同摩尔浓度的t-PSA、PSA-ACT和f-PSA分析物的反应性,研究结果表明,同一对抗体与t-PSA、PSA-ACT和f-PSA的反应基本一致.在所建立的检测体系中,以6C4抗体作为捕获抗体、生物素化16E5抗体作为检测抗体所建立的生物素-亲和素二步反应"夹心"ELISA法的最低检测限度为0.2μg/L,批内检测变异为3.5%,批间变异为5.0%,检测平均回收率为100.2%.生物素-亲和素二步反应"夹心"ELISA法分析28份前列腺癌的血清PSA水平为1.86~92.55μg/L,平均为23.14±21.10μg/L;40份BPH血清PSA水平为1.04~18.10μg/L,平均为5.76±4.54μg/L;172份非前列腺疾病和健康男性血清PSA水平为0.14~4.14μg/L,平均为1.10±0.81μg/L;30份其他肿瘤的血清PSA水平为0.17~3.52μ.g/L,平均为1.09±0.85μg/L;10份健康女性血清中未测到PSA.经显著性t检验,前列腺癌患者的血清PSA水平与BPH、非前列腺疾病患者的PSA水平存在显著性差异(t=4.36,P<0.01);BPH患者的血清PSA水平与非前列腺疾病患者的PSA水平也存在显著性差异(t=6.49,P<0.01).