【摘 要】
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目的:本研究采用ox-LDL诱导HCAEC损伤,建立动脉粥样硬化细胞模型,探讨SIRT1对动脉粥样硬化中炎症的影响及可能机制。方法:1.Sirt1基因表达的验证。取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、空质粒对照组、空质粒+ox-LDL组、Sirt1过表达+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组,PDTC(NF-κB阻滞)+Sirt1干扰+ox-LDL组。利用Lipofectamine 2
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目的:本研究采用ox-LDL诱导HCAEC损伤,建立动脉粥样硬化细胞模型,探讨SIRT1对动脉粥样硬化中炎症的影响及可能机制。方法:1.Sirt1基因表达的验证。取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、空质粒对照组、空质粒+ox-LDL组、Sirt1过表达+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组,PDTC(NF-κB阻滞)+Sirt1干扰+ox-LDL组。利用Lipofectamine 2000脂质体转染法转染人冠状动脉内皮细胞株24h后加入ox-LDL继续培养24h,荧光显微镜下观察转染情况;应用RT-PCR检测细胞中Sirt1的mRNA水平;Western blot方法检测细胞中SIRT1的蛋白表达水平。2.研究SIRT1对HCEAC炎症反应的影响。取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、空质粒对照组、空质粒+ox-LDL组、Sirt1过表达+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组。应用RT-PCR检测ICAM-1的mRNA水平;Western blot方法检测细胞中ICAM-1蛋白表达水平;ELISA法检测各组IL-1、hs-CRP的表达。3.探讨SIRT1发挥抗炎作用的机制。(1)取对数生长期HCAEC,分为正常对照组和100μg/ml ox-LDL组,免疫荧光观察NF-κB定位情况。(2)取对数生长期HCAEC,分为空质粒+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组、PDTC+Sirt1干扰+ox-LDL组,应用RT-PCR检测ICAM-1的mRNA水平;Western blot检测细胞中ICAM-1蛋白表达水平;ELISA法检测各组IL-1、hs-CRP的表达。(3)取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、空质粒+ox-LDL组、Sirt1过表达+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组,Western blot检测乙酰化NF-κB、NF-κB蛋白表达水平。结果:1.脂质体Lipofectamine 2000转染HCAEC细胞24h后换液,加入100μg/ml ox-LDL继续培养24h。转染组荧光显微镜下观察转染成功,mRNA及蛋白水平验证SIRT1能够成功表达。2.Sirt1过表达能够抑制ox-LDL诱导的ICAM-1的RNA水平表达及蛋白表达、hs-CRP、IL-1的蛋白表达(p<0.05);Sirt1干扰能够促进ox-LDL诱导的黏附分子ICAM-1的RNA水平表达及蛋白表达、炎性因子hs-CRP、IL-1的蛋白表达(p<0.05)。3.正常细胞NF-κB弥散于整个细胞内,100μg/ml ox-LDL促进NF-κB入核;PDTC+Sirt1干扰+ox-LDL组与Sirt1干扰+ox-LDL组相比,ICAM-1的mRNA表达降低(p<0.05),ICAM-1、IL-1、hs-CRP蛋白表达降低(p<0.05);SIRT1过表达抑制ox-LDL诱导的转录因子NF-κB、乙酰化NF-κB的蛋白表达(p<0.05),SIRT1干扰促进ox-LDL诱导的转录因子NF-κB、乙酰化NF-κB蛋白表达(p<0.05)。结论:SIRT1可以抑制HCEAC中由ox-LDL诱发的炎症反应,并通过抑制NF-κB通路的激活产生抗炎作用,因此SIRT1可能通过抗炎作用治疗动脉粥样硬化。
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