KK-42对日本沼虾蜕皮激素及其受体表达的影响

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日本沼虾(Macrobrachium nipponense)是我国重要的淡水经济虾类。前期研究已经证明,KK-42处理日本沼虾幼虾,可以显著促进其生长,但是对于KK-42促进日本沼虾生长的机理仍不了解。鉴于蜕皮激素受体(ecdysteroid receptor, EcR)和维甲酸X受体(retinoid-X-receptor, RXR)在甲壳动物生长和发育中的重要作用,以日本沼虾为材料,研究了上述两种基因的表达与蜕皮周期的相关性,并研究了KK-42对上述两种基因表达的影响,结合测定血淋巴中20-羟蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)滴度,旨在从分子水平探讨KK-42促生长的机制。将体长4.5±0.5cm的日本沼虾随机分成2组:实验组和对照组,其中,实验组用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液浸泡处理1min,对照组用不含KK-42的溶液做相同的处理。于KK-42处理后不同时间解剖肝胰腺,用Real-time PCR方法测定EcR mRNA和RXR mRNA的表达水平;于KK-42处理后不同时间抽取血淋巴,采用反相高效液相色谱(reverse-phase high-performance liquid chromatography, HPLC)检测血淋巴中20E的滴度。结果如下:HPLC结果显示,KK-42处理可显著提高血淋巴中20E滴度,在处理后3h和6h比对照组分别增加了121.71%(P<0.05)、268.96%(P<0.01)。Real-time PCR结果表明,EcR在肝胰腺、肌肉、表皮和眼柄等组织均有表达,其中肝胰腺和表皮表达量最高;肝胰腺EcR基因的表达量在蜕皮前期(D2-3)最高,蜕皮后期(A)较低。KK-42处理可显著诱导处于蜕皮间期的日本沼虾肝胰腺EcR mRNA的水平,且在处理后第6h和第12h分别比对照组提高了233.56%(P<0.01)和110.73%(P<0.05)。Real-time PCR结果表明,RXR在肝胰腺、肌肉、表皮和眼柄等组织均有表达,其中肝胰腺表达量最高;肝胰腺RXR基因的表达量在蜕皮前期(D2-3)最高,蜕皮后期(B)较低。KK-42处理可显著诱导处于蜕皮间期的日本沼虾肝胰腺RXR mRNA的水平,且在处理后第3h和第12h分别比对照组提高了195.53%(P<0.01)和80.83%(P<0.05)结论:EcR基因和RXR基因的表达与蜕皮周期具有一定的相关性,咪唑类物质KK-42能够显著提高日本沼虾血淋巴中20E滴度,诱导肝胰腺中EcR基因和RXR基因的表达。
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