表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌CNE2细胞端粒酶活性的影响。

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【背景】鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)是头颈部常见恶性肿瘤,临床上以放疗和化疗为主要治疗手段,虽然随着调强放疗技术发展,鼻咽患者治愈率提高及副反应减少,但是晚期患者五年生存率仍不理想,且放疗后仍有不可忽视的毒性反应。而且容易产生多药耐药(multidrug resistance, MDR)现象。目前,寻找出高效、不良反应小的新一代抗肿瘤药物已是当务之急。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶多酚的主要成份,从绿茶中提练出来的一种高效低毒的天然化合物,同时兼有抗肿瘤和免疫调节双重作用,因此研究EGCG抗鼻咽癌的药理作用机制,具有重大的理论及实践意义,具有广阔的市场前景。随着国内外对EGCG研究的深入,其抑制肿瘤细胞增殖及促进肿瘤细胞凋亡已达到共识[1-3]。但其具体机制不是明确。端粒酶是一种具有逆转录活性的DNA聚合酶,它与细胞生长密切相关。大部分人类体细胞无或低端粒酶活性,故其分裂次数有限,最终细胞走向衰老与凋亡。相反,少部分增殖活跃人类体细胞、生殖细胞与大部分肿瘤细胞(约占90%)其端粒酶活化,端粒不因复制而缩短,细胞走向永生化。端粒酶包含具有逆转录酶活性的逆转录蛋白(human telomerase reverse transcriptaseprotein,hTERT)和端粒酶RNA(TERC/TR)。hTERT是端粒酶的催化亚基,也是端粒酶激活的关键限速因子。本文将从细胞分子水平探讨EGCG对鼻咽癌细胞株CNE2的端粒酶hTERT及其基因表达的影响,为探讨广谱天然绿茶多酚EGCG在体内、外的抗鼻咽癌机制,为EGCG的新药开发提供理论和科研依据。【目的】通过细胞生物学、分子生物学实验,探讨广谱天然绿茶多酚EGCG在体外鼻咽癌CNE2细胞的抗鼻咽癌机制,为EGCG的新药开发提供理论和科研依据。【方法】1.通CCK-8试验来检测EGCG对鼻咽癌CNE2细胞株的增殖抑制作用。2.通过流式细胞学实验检测EGCG对鼻咽癌CNE2细胞株周期及凋亡的影响。3.利用RT-PCR实验来检测EGCG对鼻咽癌CNE2细胞株hTERT mRNA表达的影响。4.利用Western blot实验来检测EGCG对鼻咽癌CNE2细胞株hTERT蛋白及c-Myc蛋白表达的影响。【结果】1. EGCG对鼻咽癌CNE2细胞株的增殖具有明显抑制作用,且呈现时间及药物浓度依赖性。2. EGCG具有阻滞鼻咽癌CNE2细胞周期进展作用,使G0/G1期比例升高(P<0.001),S期比例下降(P<0.002)。低浓度组(100ug/mL)细胞周期阻滞呈时间依赖性,随着浓度增大及作用时间廷长细胞周期阻滞时间依赖性不明显,但细胞凋亡率升高。3. EGCG具有促鼻咽癌CNE2细胞凋亡作用,随着作用时间廷长其凋亡率升高(P<0.001),呈时间依赖性。4. EGCG具有下调鼻咽癌CNE2细胞株hTERT mRNA(P<0.001)及其蛋白的表达,且两者成正相关性。5. EGCG具有下调鼻咽癌CNE2细胞株c-Myc蛋白的表达,且与hTERT mRNA及其蛋白的表达呈正相关性。【结论】EGCG对鼻咽癌CNE2细胞株具有抑制增殖,促进凋亡作用,其可能原因是通过下调鼻咽癌CNE2细胞株C-Myc蛋白的表达从而抑制了hTERT mRNA的转录及hTERT蛋白翻译,造成端粒酶的活性下降。
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