基于PI3K-Akt-FoxO信号通路探讨四物汤调节骨髓基质细胞增殖和凋亡的机制

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuyanfang1968
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目的:观察四物汤对小鼠骨髓基质细胞OP9细胞增殖和凋亡的影响,检测四物汤作用后PI3K、Akt、FoxO、CyclinD1、p27KIP1、Bim基因表达,Akt和FoxO蛋白质的磷酸化水平,用PI3K选择性抑制剂作用后上述指标的变化,探讨四物汤调节OP9细胞增殖和凋亡的PI3K-Akt-FoxO信号通路机制。方法:MTT法检测不同浓度四物汤对OP9细胞增殖的影响,流式细胞术观察四物汤对OP9细胞的细胞周期和凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测PI3K、Akt、FoxO、CyclinD1、p27KIP1及Bim的mRNA表达,western blot检测PI3K、Akt、FoxO、CyclinD1、p27KIP1、Bim的蛋白质表达及Akt和FoxO的磷酸化水平,免疫细胞化学方法检测PI3K、Akt、CyclinD1、p27KIP1、Bim的蛋白质表达及FoxO和Akt的磷酸化水平,用PI3K选择性抑制剂LY294002作用于OP9细胞后,观察上述指标的变化,验证四物汤对OP9细胞PI3K-Akt-FoxO信号通路的作用。结果:(1)四物汤促进OP9细胞的增殖;(2)四物汤能促进OP9细胞由G0/G1期进入S期,明显抑制细胞凋亡;(3)四物汤显著上调PI3K、Akt和CyclinD1基因的表达,显著下调FoxO、p27KIP1和Bim基因表达,提高Akt和FoxO的磷酸化水平;(4)四物汤能够显著上调OP9细胞PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO及CyclinD1蛋白表达水平,显著下调p27KIP1、Bim蛋白表达水平;(5)LY294002显著抑制四物汤上调PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO及CyclinD1基因表达的作用,显著抑制四物汤下调FoxO、p27KIP1、Bim基因表达的作用。结论:四物汤具有促进OP9细胞增殖、抑制其凋亡的作用,其作用与调节PI3K-Akt-FoxO信号通路有关。
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