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研究背景: 强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)是一种多见于青少年,以中轴关节慢性炎症为主,也可累及内脏及其他组织的慢性进展性风湿性疾病。AS 以骶髂关节炎为标志,有明显的家族聚集现象,与 HLA-B27 密切相关,但确切病因至今尚未明确。近年国外有报道父母育龄和出生序列对转基因小鼠肌腱端病的发生有影响,也有报道指出在人类 AS 家系中,胎次及父母生育年龄(简称育龄)影响 AS 的发病。本研究的目的首先是了解父母育龄及胎次效应是否影响 AS 的发病,从而了解 AS 发病的相关危险因素,为预测 AS 患者同胞的发病风险提供理论依据。另外,越来越多的研究提示除 B27 以外,在 HLA 区内外均存在其它 AS 的易感基因。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)α 在免疫反应中具有介导炎症以及免疫调节作用,在许多自身免疫性疾病的血液和组织中的高表达,使 TNF-α 的重要性得到广泛关注。最近发现抗 TNF-α 单抗和TNF-α 受体拮抗剂可使 AS 的病情及病程得到迅速而有效的控制,说明 TNF-α对 AS 的易感性或疾病的发生发展有明显的影响。TNF-α 的产生受转录水平的调节,位于染色体 6p21.31,MHC III 的 TNF-α 基因可能是 AS 的侯选易感基因,其基因启动子区的多态性与 AS 的相关研究是近年来 AS 遗传学研究的热点,特别是-238 和-308 位点,但研究方法多样,研究结果不一,其中用 DNA 直接测 - 2 -<WP=6>第二军医大学 硕士学位论文序法进行这方面研究尚未见报道。而且,研究-238 和-308 位点基因型多态性和AS 临床表现型关系的报道也不多见。为了明确在中国汉族人群中 AS 患者TNF-α 基因启动子的多态性分布,及其对 AS 的易感性和疾病临床表现型的影响,我们用 DNA 直接测序法研究 AS 患者和对照人群的 TNF-α 基因启动子区域-238 和-308 位点的多态性,并以 AS 患者的临床资料为依据,用统计学方法探讨了基因型和临床表现型的关系。 第一部分:父母育龄及胎次效应对强直性脊柱炎发病的影响 研究目的: 了解 AS 是否有父母育龄及胎次效应,并研究不同胎次对 AS 罹患风险率的影响。 研究方法: 收集 1999 年至今在第二军医大学长海医院就诊的 AS 患者 215 例,均根据1984 年纽约修订的 AS 诊断标准确诊,并完成问卷调查,包括同胞的各种信息如出生序列、年龄、B27 是否阳性和 AS 病史等。用 Haldane 和 Smith 方法研究215 例 AS 患者的父母育龄及胎次效应,公式 X=|∑6A-∑?X6A|/(∑V6A)1/2。另外,用同样的方法对 41 例 B27 阴性患者和 164 例 B27 阳性患者资料进行对比分析。按照 Baudoin 的方法分析不同胎次是否对 AS 的罹患风险率有影响,本研究主要对首胎、二胎及末胎进行了分析。 结果: 用 Haldane 和 Smith 方法的计算公式算得 215 例 AS 患者 X=4.02>2,164例 B27 阳性患者 X=3.54>2,41 例 B27 阴性患者 X=1.58<2;首胎 AS 患者的 - 3 -<WP=7>第二军医大学 硕士学位论文数目明显少于期望值(37:52.6,P<0.01),而末胎 AS 患者的数目明显高于期望值(81:52.6,P<0.05)。 结论: AS 有父母育龄及胎次效应,这种效应为父母育龄越大或胎次越晚者易患AS;B27 阴性 AS 无父母育龄及胎次效应,B27 阳性 AS 有父母育龄及胎次效应,提示 B27 阴性 AS 和 B27 阳性 AS 有遗传异质性。首胎比起非首胎的儿女有更低的 AS 罹患风险率,而末胎比起非末胎的儿女有更高的 AS 罹患风险率,较高的出生序列可能是 AS 的风险因子。第二部分:肿瘤坏死因子 α 基因启动子-238 和-308 位点多态性对强 直性脊柱炎的易感性和临床表现型的影响 研究目的: 探讨 TNF-α 基因启动子-238 和-308 位点多态性对 AS 易感性和临床表现型的影响。 研究方法: 随机选择 1999~2003 年在第二军医大学长海医院就诊的 108 例 AS 患者作为研究对象。所有 AS 患者均符合 1984 年修订的纽约 AS 诊断标准。另从长海医院中国人民解放军上海血站随机选取 100 名正常健康献血者作为对照组。收集 AS 组和对照组的血液样本,抽取基因组 DNA,采用 DNA 直接测序法,对108 例 AS 患者和 100 名正常对照者 TNF-α-238 和-308 位点进行基因分型。对AS 患者组按照基因型分组,比较其临床特征(男女性别比、起病年龄、病程、 - 4 -<WP=8>第二军医大学 硕士学位论文B27 阳性率、虹膜睫状体炎发生率、外周关节受累率、X 线分级等),分析基因型与疾病临床表现之间的关系。 结果: AS 组 TNF-α-238G/G 基因型有 106 例(98.1%),-238G/A 基因型有 2 例(1.9%),正常对照组两种基因型分别有 95 例(95.0%)和 5 例(5.0%),两组比较无显著性差异;AS 组 TNF-α-308.1.1(G/G)的基因型有 89 例(82.4%),-308.1.2(G/A)的基因型有 19 例(17.6%),正常对照组中-308.1.1(G/G)有 85 例(85.0%),-308.1.2(G/A)有 14 例(14.0%),-308.2.2(A/A)有 1 例(1.0%),两组比较亦无显著性差异。对 AS