MCPH1过表达对宫颈癌SiHa、CaSKi细胞凋亡的影响

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常染色体隐性遗传原发性小头畸形基因MCPH1,也称为BRIT1,在DNA损伤、修复和抑制癌的过程中有重要作用;近年来研究表明其在肿瘤的发生发展中也发挥重要作用。MCPH1在宫颈癌病例中的表达情况尚未见报道,本文主要就MCPH1/BRIT1在宫颈癌中的表达情况及其对宫颈癌SiHa、CaSKi细胞的影响进行初步探索,为今后从基因方向治疗宫颈癌提供了有效依据。研究方法:1.应用SYBR实时荧光定量PCR法检测31例宫颈癌标本及其相对应的宫颈正常组织中MCPH1mRNA的表达情况;运用immunohistochemistry检测MCPH1在宫颈癌标本及其相对应的正常组织中蛋白表达情况。2.根据MCPH1在宫颈癌中的表达情况,本实验组成员袁成福博士构建过表达质粒pcDNA3.1-MCPH1-HA,本人运用双酶切鉴定和测序来鉴定重组质粒pcDNA3.1-MCPH1-HA。3.用脂质体2000瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-MCPH1-HA进入宫颈癌SiHa、CaSKi细胞中。4.分别运用Real-Time PCR、western blot检测MCPH1在宫颈癌SiHa、CaSKi细胞中是否过表达。5.用流式细胞仪检测重组质粒对宫颈癌SiHa、CaSKi细胞的影响。实验结果:1.在31例宫颈癌标本中,MCPH1mRNA的表达,19例癌标本比宫颈正常组织低,1例癌标本比宫颈正常组织高,其余样本无统计学意义;另外6例癌标本比癌旁组织低,1例癌标本比癌旁组织高,其余无统计学意义。2.在31例宫颈癌标本中,MCPH1蛋白的表达结果,采用两样本比较的秩和检验分析数据,P=0.001<0.05,说明宫颈癌及其对应宫颈正常组织两组间MCPH1的表达具有显著差异,由于宫颈癌组的平均秩23.69小于宫颈正常组织组平均秩35.88,故宫颈癌组MCPH1蛋白的表达明显低于宫颈正常组织组。3.重组质粒pcDNA3.1-MCPH1-HA构建成功,经测序鉴定正确。4.将重组质粒瞬时转染进宫颈癌SiHa、 CaSKi细胞,运用Real-Time PCR、免疫印迹检测发现MCPH1mRNA和蛋白表达水平明显高于阴性对照和正常对照组。5.转染重组质粒的宫颈癌SiHa、CaSKi细胞凋亡率比阴性对照组和正常对照组明显增多。结论:1. MCPH1在宫颈癌中的表达下调。2.成功构建过表达质粒pcDNA3.1-MCPH1-HA,并瞬时转染进入宫颈癌SiHa、CaSKi细胞,发现MCPH1可以诱导宫颈癌SiHa、CaSKi细胞凋亡增加,为进一步研究MCPH1基因在宫颈癌中的作用奠定了一定的基础。
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