论文部分内容阅读
目的：糖尿病大血管病变主要为动脉粥样硬化（AS）的病理改变，是 2 型糖尿病的主要慢性并发症之一，其发病机制尚未完全阐明，其中胰岛素抵抗（IR）及其继发的相关代谢紊乱是 AS 发生发展的危险因素。罗格列酮（RSG）属于噻唑烷二酮类药物（TZDs），是一种新型的口服抗糖尿病的胰岛素增敏剂，该药物除了具有改善胰岛素抵抗、降低血糖水平的作用外，近年来发现尚有抗 AS 的性能。二甲双胍通过增加外周组织对葡萄糖的摄取及抑制糖原异生、糖原分解等途径降低血糖。除此之外，二甲双胍尚具有降低胰岛素水平、增加胰岛素敏感性，降压，改善致粥样硬化脂相，改善血液动力学及血管平滑肌的舒缩功能的作用，故对 2 型糖尿病患者的大血管危险因素有一定的有益作用。因此，本研究通过喂养高热量饮食并通过腹腔注射小剂量的链脲佐菌素（STZ）,建立具有 IR 的 2 型糖尿病大鼠模型，并分别给予罗格列酮、二甲双胍治疗，在此基础上观察胰岛素抵抗相关因素的变化，探讨 AS 的发病机制，阐明罗格列酮阻止或延缓 AS 发生发展的作用机制。 方法：将实验动物随机分为正常对照组(NC 组)和糖尿病组（DM 组），正常对照组喂养标准大鼠饲料，糖尿病组饲以高糖高脂饲料（其中含蔗糖 10%，熟猪油 15%，胆固醇 2%，胆酸 0.25%）4 周，诱发胰岛素抵抗，继以腹腔注射小剂量──────────────────────────────────────── 1<WP=4>中 文 摘 要的链脲佐菌素（STZ，30mg/kg）,损伤部分胰腺，使之出现高血糖。8 周末把糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组（DC组）、糖尿病罗格列酮治疗组（DR 组）、糖尿病二甲双胍治疗组（DM 组）。从实验第 9 周起，DR 组以罗格列酮 3mg/kg.d溶于蒸馏水灌胃，每日一次；DM 组以二甲双胍 625mg/kg.d溶于蒸馏水，分两次灌胃，NC 组和 DC 组给予等量蒸馏水。实验全程共持续 18 周，于实验的 4 周、8 周、18 周末分别测量体重，采血测定空腹血糖（FBG）、血清胰岛素(FIN)、血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇（TC）。第 18 周末实验结束前，代谢笼收集 24 小时尿液，放射免疫分析法测定尿白蛋白排泄率（UAER）；股动脉放血处死动物，收集血液，剪开胸腔分离主动脉；全自动生化分析仪测定 TG、TC，氧化酶法测定 FBG，放射免疫分析法测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及瘦素（Leptin）水平；取胸主动脉进行 HE、Verhoff 铁苏木素弹性纤维及免疫组化染色，观察主动脉形态及病理变化，用图像分析系统测量主动脉横断面病灶总面积与管壁总面积比值，用免疫组化的方法检测主动脉 TNF-α的蛋白表达水平，分析 TNF-α、Leptin、UAER 与胰岛素抵抗、主动脉损伤面积的相关性。 结果： 1）糖尿病组大鼠喂养高糖高脂饮食 4 周后，其 （体重较正常对照组增加（P<0.01）；TG、TC 较正常对照组升高（P<0.05, P<0.05）；FIN 较正常对照组明显升高（P<0.01），FBG 与正常对照组相比无显著性差异（P>.05），ISI 较正常对照组明显降低（P<0.01），表明高糖高脂饮食喂养 4 周后诱发出胰岛素抵抗。(见表 1)（2）小剂量 STZ 腹腔注射后 4 周，糖尿病组 FBG 较正常对照组明显升高（P<0.01）；FIN 较注──────────────────────────────────────── 2<WP=5>中 文 摘 要射STZ前降低，但与正常对照组比较无显著性差异（P>0.05）；糖尿病组 ISI 与正常对照组相比显著降低(P<0.01),说明胰岛素抵抗继续存在；糖尿病组体重较正常对照组增加，但无显著性差异（P>0.05）；TG、TC 水平糖尿病组较正常对照组升高(P<0.01，P<0.01)，至此已成功建立具有胰岛素抵抗的 2型糖尿病大鼠模型。（见表 2）（3）18 周末实验结束时，与DC 组相比，DR 组和 DM 组 FBG、FIN 水平均降低(P<0.05，P<0.01；P<0.01，P<0.05)；与 DC 组相比，DR 组的 TG 水平显著性降低(P<0.01)、TC 水平无明显下降(P>.05)，DM 组的 TG、TC 水平均显著性降低(P<0.05，P<0.05)；DR 组血清TNF-α、Leptin 水平、UAER 低于 DC 组(P<0.01, P<0.05,P<0.05)；DM 组血清 TNF-α、Leptin 水平、UAER 虽有所下降，但未达到显著性差异，以上各项指标 DC 组高于 NC 组。DC 组主动脉损伤面积大于 NC 组(P<0.01)，两治疗组主动脉损伤面积均小于 DC 组，DR 组主动脉损伤面积减少的更为明显(P<0.01, P<0.05)。（见表 3）（4）TNF-α免疫组化显示(图 16-19)：NC 组主动脉 TNF-α几乎无表达，DC 组主动脉 TNF-α的表达明显增强，其平均积分光密度值（integraoptical density,IOD）明显高于 NC 组（P<0.01），DR 组的 TNF-α的表达强度及平均积分光密度值明显小于 DC 组（P<0.01）；DM 组的 TNF-α的表达强度及平均积分光密度值与 DC 组相比无显著性差异（P>0.05）。光镜观察主动脉的病理变化（图 8-15）：NC 组主动脉内膜平坦，内皮细胞扁平，紧贴于平直的内弹力板上，中膜弹力板与平滑肌细胞整齐的相间平行排