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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,常导致严重肝病,包括肝硬化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)。在HCC的形成过程中,乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染是引发肝细胞癌的主要危险因子。最近的研究发现,糖酵解与肿瘤的形成和预后关系密切。磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase PGK)是糖酵解的关键酶,在正常肝组织中,PGK1蛋白表达水平明显低于肝硬化和肝癌组织,HCC患者糖酵解作用增强,提示PGK1表达水平可作为HCC患者预后的独立指标。目的：本研究旨在应用实时荧光PCR方法证实HBx蛋白对PGK1的反式激活作用；考察HBxAg对启动子活性的影响；验证核心启动子序列中SP1结合位点具有与肝癌相关细胞系的细胞核蛋白结合的活性。方法：应用实时荧光定量PCR技术比较在HepG2.2.15细胞中与人HepG2细胞中PGK1在mRNA水平上的变化；构建PGK1-promoter荧光报告载体,通过分析其活性确定启动子的核心区域：应用凝胶迁移阻滞实验(EMSA)验证启动子核心区域的SP1位点与PGK1启动子结合活性,定点突变后检测其活性变化。结果：本研究取得以下四方面的结果。首先,HepG2.2.15细胞中PGK1 mRNA的表达量是人肝癌HepG2细胞中的3.6倍,pcDNA3.1(-)-HBx转染HepG2细胞24小时后,经过实时荧光定量PCR检测,PGK1基因mRNA水平上调2.26倍。其次,实验中成功构建PGK1-promoter1-9系列荧光素报告质粒删除体,且测序证实插入序列与理论序列一致,并在HepG2细胞中得到表达。成功定位PGK1启动子的核心区域。第三方面,PGL4.10-PGK1-promoter 1分别与pcDNA3.1(-)-HBx及pcDNA3.1(-)共转染人肝癌HepG2细胞,试验组与对照组的转录活性相比提高1.86倍。第四方面,研究发现,SP1位点具有与PGK1启动子的结合活性,定点突变后其活性丧失。结论：本研究的创新点表现在以下几个方面,HBV能够通过HBxAg上调PGK1基因表达水平；PGK1基因最小启动子活性区域位于转录起始位点上游152bp范围内(一247bp--95bp)；转录因子sp1参与PGK1转录调控过程。本研究初步揭示了HBx蛋白能够反式激活PGK1基因的表达;HBx可提高PGK1启动子的转录活性以及SP1位点可能参与PGK1的转录调控；PGK1作为糖酵解相关蛋白在HBx致病机制中的作用,为PGK1成为HBV相关HCC患者预后指标提供了有价值的线索。