鸡传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗免疫效力研究

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鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的,严重危害养鸡业的重要的病毒性传染病之一。因为IBV血清型众多,且不同的血清型之间的交叉保护力弱,给疫病的防控带来了极大的困难。目前IB的预防措施主要还是依赖于疫苗接种,生产中常采用的是弱毒苗和弱毒苗,弱毒苗存在毒力返祖和自然散毒的隐患,灭活疫苗虽然安全性好,但是其免疫保护效果维持时间短,需要多次注射免疫,所需的成本较高。核酸疫苗具有安全性好和诱导全方位的免疫应答等优点,而IBV的表面纤突(S)蛋白基因是最重要的免疫原性蛋白,能诱导良好的保护性免疫,它又分为S1和S2 2个亚单位,其中S1蛋白是决定IBV特异性抗原决定簇的主要蛋白。M基因相对而言保守性较高,与病毒复制有关,且其可能存在具有免疫作用的抗原决定簇。因此,研制IBV表位核酸疫苗这种新型基因工程疫苗,对防制IBV具有重要的意义。本研究应用筛选出的IBV毒株的结构蛋白基因S1基因的T细胞抗原表位盒和B细胞抗原表位盒,酶切连接入真核表达载体pVAX,构建7组表位核酸疫苗,研究其免疫保护效力。分别利用前期筛选出的IBV的结构蛋白基因S1全基因、S1基因的T细胞抗原表位盒和结构蛋白M全基因,构建3组真核表达质粒:pVAX-S1、pVAX-S1T+M、pVAX-S1+S1T+M;IBV的结构蛋白基因S1基因的T细胞抗原表位盒、Australia T株和M41株的S1基因的B细胞抗原表位,构建4组真核表达质粒pVAX-S1B(M41)、pVAX-S1B(T)、pVAX-S1T+S1B(M41)、pVAX-S1T+S1B(T);将原有的质粒S1B(T)、S1T重新设计引物,改造酶切位点重新连接构成pVAX-S1BT+S1T。将每组提取制备的质粒溶液通过腿部肌肉多点注射的方式免疫7日龄SPF雏鸡,28日龄加强免疫一次。同时设立PBS组作为对照组。分别在首免前及免疫后的7d、14d、21d以及二免后的7d每组随机抽取3只鸡,翅静脉采血并分离血清,用间接ELISA方法检测特异性抗体水平。二免后第10d用剂量106ELD50/只的IBV病毒液滴鼻点眼攻毒,通过保护率和排毒量检测的结果这两个指标来评价疫苗的保护效果。抗体效价结果显示:pVAX-S1、pVAX-S1T+M组与PBS组相比差异显著(p<0.05);pVAX-S1B(T)、pVAX-S1T+S1B(M41)和pVAX-S1T+S1B(T)组与PBS组相比差异均显著(p<0.05);pVAX-S1B(T)、pVAX-S1B+S1T组与PBS组相比差异均显著(p<0.05)。攻毒结果表明,疫苗免疫组pVAX-S1和pVAX-S1T+M免疫后,有效诱导了鸡体的免疫反应,分别能提供80%(8/10)和70%(7/10)的保护率;疫苗组pVAX-S1、pVAX-S1T+M、pVAX-S1B(T)免疫后,其保护率明显增高,分别为75%(6/8)、62.5(5/8)和75%(6/8);疫苗组pVAX-S1B(T)、pVAX-S1B+S1T免疫后,提供的保护效力分别为84.7%(11/13)和69.3%(9/13)。综上所述,本实验表明筛选的IBV表位抗原成分能够有效发挥保护效力,为研制安全有效的新型IBV疫苗提供了新的途径。
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