冻融卵巢移植技术是将获得的卵巢皮质切成片状，冷冻复苏后移植到受体一定部位，诱发卵泡发育成熟。虽然卵巢组织的冷冻保存在近年取得了很大进展，但该技术仍处于研究阶段，尚不能广泛应用于临床。如何提高冻融后卵巢组织颗粒细胞的发育潜能，降低其凋亡的发生，促进卵巢血管生成因子的生成以利于卵泡存活和发育，是卵巢组织冻存和移植需要解决的问题。本研究以大鼠为动物模型分三个部分对程序降温慢速冷冻法对卵巢原始、初级卵泡的影响以及促性腺激素FSH对体外培养和自体移植卵巢组织VEGFmRNA表达和卵泡生长发育的作用进行初步探讨。第一部分程序降温冷冻和复苏对大鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡和卵巢组织VEGFmRNA表达的影响目的：通过观察冻融大鼠卵巢组织在体外培养中原始卵泡和初级卵泡的形态以及卵母细胞和颗粒细胞凋亡情况，探讨冻融过程对原始卵泡和初级卵泡存活以及VEGFmRNA表达的影响。方法：将4-6周龄性未成熟的S-D雌性大鼠的新鲜卵巢组织和程序降温慢速冷冻方法冻融后卵巢组织，作为新鲜组和冻融组，体外培养24小时作为新鲜培养组和冻融培养组。HE染色，组织学观察卵泡形态；TUNEL方法检测卵泡凋亡；RT-PCR方法测定卵巢组织VEGFmRNA表达。结果：（1）冻融组形态正常的原始卵泡与新鲜组相比没有显著差异（P＞0.05），但形态正常的初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡百分率显著低于新鲜组（P＜0.01）。冻融培养组与新鲜培养组相比，原始和初级卵泡形态正常百分率都有显著下降（P＜0.01）。（2）冻融组中卵母细胞损伤的初级卵泡和颗粒细胞损伤的初级卵泡均高于新鲜组。经体外培养后，冻融卵巢原始卵泡和初级卵泡中卵母细胞和颗粒细胞损伤卵泡百分率较新鲜培养组织都有显著增加（P＜0.01）。（3）新鲜和冻融卵巢组织原始卵泡凋亡率和初级卵泡凋亡率没有差异，但经体外培养后，冻融卵巢原始卵泡和初级卵泡凋亡率，以及卵母细胞和颗粒细胞凋亡率较新鲜培养组织都有显著增加（P＜0.01）。（4）培养24h后冻融卵巢组织VEGF mRNA表达有所下降。结论：（1）冻融过程对原始卵泡和生长期卵泡都可造成一定程度的损伤，随着卵泡发育阶段的增加，损伤的程度加重。（2）冻融过程诱导卵泡凋亡的发生，凋亡可能是冷冻损伤的机制之一。（3）冻融过程可降低卵巢组织VEGF mRNA的表达第二部分卵泡刺激素FSH对体外培养中大鼠颗粒细胞凋亡和卵巢组织VEGFmRNA表达的影响目的：通过在培养液中添加卵泡刺激素FSH，探讨FSH对体外培养中大鼠颗粒细胞凋亡和卵巢组织VEGFmRNA表达的影响。方法：分别将新鲜卵巢和冻融卵巢卵泡颗粒细胞分离出来，体外培养4天，对比培养液中添加FSH与未添加FSH条件下颗粒细胞凋亡率和培养上清液VEGF浓度。在新鲜和冻融卵巢组织培养中对比培养液中添加FSH与未添加FSH条件下卵巢组织VEGFmRNA的表达。结果：（1）培养液中添加FSH后，冻融颗粒细胞凋亡率降低。（2）冻融颗粒细胞分泌VEGF减少，无论是新鲜颗粒细胞还是冻融颗粒细胞，在培养液中添加10ng／mlFSH都可使VEGF分泌增加（P＜0.05）。（3）培养液中添加FSH后，新鲜和冻融组卵巢组织VEGF mRNA表达增加（P＜0.05）。结论：（1）培养液中添加10ng／mlFSH，可减少从新鲜和冻融卵泡分离的颗粒细胞在体外培养中细胞的凋亡。（2）培养液中添加10ng／ml FSH，增加从新鲜和冻融卵泡分离的颗粒细胞分泌VEGF水平，提高体外培养新鲜和冻融卵巢组织VEGFmRNA表达。第三部分冻融大鼠卵巢组织自体移植的实验研究目的：建立大鼠自体移植模型，探讨促性腺激素FSH对冻融卵巢移植卵血管内皮生长因子VEGF、卵泡存活和发育的影响。方法：将冻融卵巢组织自体移植回肌肉中预制的肉芽组织中，一组每日注射FSH，另一组每日注射生理盐水，观察两组卵巢中卵泡数量和各级卵泡比例，以及VEGF mRNA和PCNA表达。结果：（1）移植后卵巢组织卵泡数显著下降。移植注射FSH组的初级卵泡和次级卵泡数量比移柑注射盐水组增加（P＜0.05）。（2）移植后原始卵泡百分率下降，初级卵泡和次级卵泡百分率显著上升（P＜0.01）。移植注射FSH组与移植注射盐水组相比，原始卵泡百分率也有下降，初级卵泡百分率有增加趋势。（3）移植48h后，两个移植组VEGF mRNA水平均有升高，但移植注射FSH组和移植注射盐水组之间没有差别。移植10天后，移植注射盐水组VEGF mRNA水平降低而移植注射FSH组仍保持较高水平。（4）移植+FSH组PCNA阳性表达初级卵泡百分率较移植+盐水组高（P＜0.05）。结论：（1）大鼠冻融卵巢组织自体移植中给予外源性FSH可增加移植卵巢VEGFmRNA表达，有利于减少移植组织缺血-再灌注损伤。（2）大鼠冻融卵巢组织自体移植中给予外源性FSH可促进存活卵泡生长发育和卵泡分泌E₂。