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肠杆菌科细菌耐药性一直是人们关注的热点问题,特别是近年来ESBLs和PMQR的产生和流行,引起全球范围高度重视。食品动物源大肠杆菌可作为耐药基因储存库,对细菌耐药性在动物、环境和人之间的传播起着非常重要的作用,对人类健康和公共卫生具有重要影响。食品动物源大肠杆菌β-内酰胺酶和PMQR是近年来耐药性研究的热点,然而,关于鱼源大肠杆菌β-内酰胺酶和PMQR的研究,目前国外仅有极少数,而国内还没有报道。本文旨在调查鱼源大肠杆菌β-内酰胺酶和PMQR基因流行情况,探讨这两类基因在菌群中的传播机制,为阐明我国水体菌群和水生动物源细菌耐药状况、评价水产养殖中使用抗生素风险提供理论依据。
本研究从广东地区不同地点的15个农贸市场采集了各类食用鱼肠道样本359份,分离鉴定共得到218株大肠杆菌,鱼源大肠杆菌的分离率大约为60％。用琼脂稀释法测定218株大肠杆菌对17种抗菌药物的敏感性,结果显示,鱼源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率最高(72.5%),其次为氨苄西林(51.4%),对喹诺酮类、复方新诺明、四环素和喹乙醇的耐药率在31.7%～41.7%之间,对氯霉素、大观霉素、多西环素、乙酰甲喹的耐药率在20%左右,而对庆大霉素、卡那霉素、头孢类的耐药率均小于10%。
用PCR方法检测β-内酰胺酶基因和PMQR基因。结果从112株氨苄西林耐药菌株中检测出17株β-内酰胺酶阳性菌株,经测序和分析,blaTEM10株,blaCTX-M2株,blaSHV5株,blaLEN2株。其中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因有3种,检出率为3.6%,分别为blaCTX-M-79、blaCTX-M-14和blaSHV-27。一种广谱β-内酰胺酶基因blaSHV-2。没有检测到OXA和CMY型编码基因。有5株大肠杆菌同时携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因,其中2株同时携带ESBLs和PMQR基因。
从80株环丙沙星耐药菌株中检测到59株PMQR阳性株,包括33株(15.1%)qnrB,5株(2.3%)qnrD,21株(9.6%)qnrS,6株(2.8%)aac(6)-Ib,其中aac(6)-Ib经测序分析,均为aac(6)-Ib-cr。没有检测到qnrA、qnrC和qepA基因。
接合转移试验表明,3株TEM+PMQR阳性菌株中,均只有TEM编码基因发生了转移,而1株TEM+CTX-M-79+QnrS的菌株,三种编码基因都发生了转移;另外一株仅携带blaCTX-M-14基因的菌株也成功发生接合转移。接合子除了对头孢菌素类和喹诺酮类耐药外,对氨基糖苷类和四环素类药物表现耐药表型。与qnrS共同发生接合转移的菌株,其携带的blaCTX-M-79基因下游存在插入元件IS903,该元件可能与CTX-M-79在动物和环境中的广泛传播密切相关。