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目的:基于帕金森病(PD)的神经炎症免疫学说,多种机制和信号通路参与其中。本研究主要探讨NF-κB与PD形成,脑内炎症因子表达和多巴胺(DA)能神经元损伤间的联系,以及介导的神经炎症损伤的可能机制。从细胞水平和动物水平及炎症遗传学角度分别探讨NF-κB信号通路,在启动PD形成中神经炎症免疫中的作用机制。方法:1)采用脂多糖(LPS)干预PC12细胞构建PD炎症细胞模型。CCK8筛选LPS和QNZ(NF-κB抑制剂)干预的最佳浓度作为后续研究基础。在LPS-PD细胞模型中用免疫组织化学法和免疫荧光法检测细胞模型中酪氨酸羟化酶(TH)的表达。ELISA检测炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)含量。QNZ及NF-κB si RNA干预LPS-PD细胞模型后,WB法检测Caspase3,NF-κB信号通路相关分子蛋白NF-κBp65及α-突触核蛋白(α-syn)、核转录因子1(Nurr1)、TH相关蛋白的表达。免疫共沉淀法探讨NF-κB和Nurr1的相互关系;2)利用脑立体定位技术采用LPS的单侧两点注射法,建造PD炎症的SD大鼠模型。分为正常对照组,PD模型组和普拉克索药物干预组各20只,药物持续干预14天。进行动物行为学检测。免疫组织化学对TH的检测。ELISA法检测炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)含量。RT-PCR检测IL-6、TNF-α、Nurr1、α-syn、NF-κBp65m RNA表达。WB法检测NF-κB信号通路相关分子蛋白NF-κBp65和Nurr1、α-syn蛋白的表达;3)选取135例PD患者和100例正常人群收集血样,采用病例对照的研究方法,进行一般资料的统计描述,ELISA检测所有入选者血清TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平并进行全血DNA提取,选择与炎症免疫相关的HLArs3129882基因多态性检测及直接测序,分析炎症因子与PD的关联性,HLArs3129882基因多态性与PD的关联性以及在维吾尔族和汉族之间的民族差异性。结果:1)(1)通过NF-κB信号通路的激活,LPS诱导建立PD炎症的细胞模型。CCK8筛选LPS和QNZ最佳浓度为600ng/m L,11n M。相对于正常细胞组,LPS-PD中TH(139±6 vs 107±4)有所减少,两组间有差异(P<0.05),免疫荧光染色可显示TH阳性表达;LPS-PD中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达增多,与正常组比较有差异(P<0.05);LPS-PD中WB检测NF-κBp65、α-syn蛋白表达增多,TH含量减少,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。(2)采用QNZ抑制NF-κB信号通路后,可减少NF-κBp65和α-syn的蛋白水平,促进TH蛋白含量增加,在正常细胞、LPS-PD以及给予QNZ干预的QNZ+LPS-PD三组间比较有差异(P<0.05);NF-κBp65、α-syn和TH在正常组和QNZ+LPS-PD组间比较无差异(P>0.05)。(3)使用QNZ和NF-κB si RNA干预模型细胞都可抑制caspase 3生成,提高细胞的存活率。WB检测正常细胞组、LPS-PD、QNZ+LPS-PD和NF-κB si RNA+LPS-PD四组细胞的α-syn、Nurr1和TH蛋白含量并比较时,四组间存在差异(P<0.05)。在QNZ+LPS-PD和NF-κBsi RNA+LPS-PD组间,除TH的表达存在差异外,其余指标比较均不存在差异(P>0.05)。(4)免疫共沉淀的结果提示NF-κB与Nurr1之间存在相互作用。(2)通过LPS可以建立PD炎症动物模型,阿扑吗啡可诱导转圈的行为学改变。给予普拉克索的药物治疗14天,正常对照组,模型组和治疗组三组脑内TH阳性细胞数量表达不同(37±1 vs 18±2 vs23±1),差异有统计学意义(P<0.05)。药物治疗可通过抑制NF-κB减少脑内炎症因子(TNF-α、IL-6)水平。RT-PCR检测到治疗组大鼠脑内TNF-α、IL-6 m RNA表达呈现下调,Nurr1上调,α-syn、NF-κBp65下调,这些指标在正常对照组,模型组和治疗组三组间有差异(P<0.05)。Nurr1、α-syn和NF-κBp65的蛋白含量在三组间也存在差异(P<0.05)。(3)PD患者血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平较正常对照组中明显增多,差异存在统计学意义(P<0.05)。炎症免疫相关基因HLArs3129882基因多态性分析其有AA、AG、GG三种基因型,AA基因型和A等位基因频率分布在PD病例组和正常对照组比较无差异,在维吾尔族和汉族两民族间分布也无统计学差异(P>0.05)。结论:1)在构建的PD的炎症细胞模型和炎症动物模型中,其机制可能是NF-κB信号通路的激活,促进细胞和血清炎症因子增加,α-syn表达增多,Nurr1减少,造成DA能神经元受损;2)NF-κB信号通路中,具有保护功能的Nurr1被减弱,使α-syn增加,促进了DA能神经元进一步损伤;3)本实验中观察到PD患者外周血清中IL-6等炎症因子水平增加,炎症免疫相关的HLArs3129882基因多态性在本实验中未发现与PD明显相关,在维族和汉族两民族间也未发现明显差异性;4)NF-κB信号通路激活可能是参与PD炎症免疫发病机制重要信号通路之一。