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研究背景新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)通常是由于围产期窒息后血流、氧气中断导致的脑损伤,其发病机制是一个复杂的病理过程,目前脑损伤的严重程度,持续时间,产前损伤的时间点难以准确界定。HIE是新生儿围产期最大的威胁之一[1-2]。近年来,新生儿危重症急救虽然取得了巨大发展,但HIE仍有较高的发病率,患儿遗留不同程度的神经系统后遗症甚至死亡[3],给家庭和社会造成沉重负。目前对于新生儿HIE的治疗缺乏有效手段。HIE的发病机制并不十分明确。炎症因子(细胞因子和趋化因子)参与了HIE的病理过程,在HIE发病机制中起到了十分重要的作用。由于目前HIE仍缺乏有效的治疗方法,因此,探讨HIE的发病机制及其可能的治疗方法尤为必要。泛素羧基末端水解酶L1(Ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1,UCHL1)对于缺血缺氧后的神经元存活起到了重要的作用。HIE的病理过程中炎症反应起到了至关重要的作用,但目前关于UCHL1参与调节脑损伤后的炎症反应的相关的相关文献报道较少,且缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-Ischemic Brain Damage,HIBD)时UCHL1对于炎症因子表达的影响并不十分明确。因此,本研究的目的是探讨HIBD时UCHL1蛋白对神经元的作用以及UCHL1蛋白对炎症因子(白介素-6,IL-6;白介素-10,IL-10;肿瘤坏死因子-α,TNF-α)表达的影响。目的探讨UCHL1蛋白在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用以及UCHL1蛋白对炎症因子(白介素-6,IL-6;白介素-10,IL-10;肿瘤坏死因子-α,TNF-α)表达的影响。材料与方法7日龄SD大鼠(40只)随机分为正常对照组(20只)和缺氧缺血(HI)组(20只),其中HI组给予缺氧缺血处理,建立HIBD动物模型,空白对照组不予处理。PC12细胞用于建立氧糖剥夺(OGD)细胞模型。PC12细胞分为:正常对照组,OGD组,LDN(即LDN-57444,UCHL1蛋白抑制剂)+OGD组,UCHL1+OGD组。各组细胞处理因素:正常对照组:正常条件培养;OGD组:氧糖剥夺处理细胞,不予UCHL1蛋白或LDN预处理细胞;LDN+OGD组:LDN预先加入细胞培养基中作用2h,然后给予OGD处理4h;UCHL1+OGD组:UCHL1预先加入细胞培养基中作用2h,然后给予OGD处理4h。6h和24h用免疫组化法检测UCHL1在幼鼠脑组织中的表达情况。24h,48h,72h用Hoeschst33258染色法检测PC12细胞凋亡情况,ELISA试剂盒检测PC12细胞上清液中IL-6、IL-10、TNF-α、UCHL1浓度。SPSS17.0统计学软件进行数据处理。结果UCHL1蛋白在HI组幼鼠中表达较正常对照组升高;在同一时间点,各组PC12细胞凋亡情况各不相同;同正常对照组相比,OGD组和LDN+OGD组TNF-α表达水平在24h,48h,72h均升高(P<0.05);同OGD组相比,LDN+OGD组TNF-α表达水平在24h,48h,72h均升高(P<0.05),UCHL1+OGD组TNF-α表达水平在24h,48h,72h均降低(P<0.05)。同正常对照组相比,OGD组IL-6表达水平在72h升高(P<0.05),LDN+OGD组IL-6表达水平在24h,48h,72h均升高(P<0.05);同OGD组相比,LDN+OGD组IL-6表达水平在24h,48h,72h均升高(P<0.05);同OGD组相比,UCHL1+OGD组IL-6表达水平在24h,48h降低(P<0.05)。同正常对照组相比,OGD组IL-10表达水平在24h,48h升高(P<0.05),LDN+OGD组IL-10表达水平在24h,48h,72h均升高(P<0.05);同OGD组相比,LDN+OGD组IL-10表达水平在24h,48h,72h均降低(P<0.05);同OGD组相比,UCHL1+OGD组IL-10表达水平在24h,48h升高(P<0.05)。同正常对照组相比,OGD组UCHL1表达水平在24h,48h,72h均升高(P<0.05);同OGD组相比,LDN+OGD组UCHL1表达水平在24h,48h升高(P<0.05)。结论HIBD后UCHL1蛋白对于神经元细胞的存活至关重要,UCHL1蛋白对于HI时神经元细胞具有保护作用,UCHL1蛋白的脑保护作用机制可能是通过下调TNF-α和IL-6的表达以及上调IL-10的表达发挥作用。