目的：肺癌是最常见的恶性肿瘤，在我国近几年其发病率有逐渐上升的趋势。在临床上以其高转移性和治疗疗效差为特征。因此对肺癌的发生与发展，侵袭与转移的研究成为呼吸系统肿瘤的研究热点。肺癌发生的分子生物学研究提示，肺癌的侵袭和转移是一个多步骤、多因素的改变过程，往往与多种癌基因、蛋白、酶的表达有关。CD44是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，主要参与细胞、细胞基质之间的特异性粘连过程，其变异体CD44v6与人类恶性肿瘤的发生与转移密切相关。然而迄今CD44v6在肺癌的原位检测报道尚少。而人类肺癌中以非小细胞肺癌(NSCLC)的发生率最高，约占75～85％，早诊率低且易出现早期转移、治疗后容易复发，其转移复发机制仍不清楚。对CD44v6与非小细胞肺癌的关系，目前尚无定论。该研究的目的在于从基因转录水平上探讨CD44v6mRNA在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。 材料与方法：临床资料：56例非小细胞肺癌原位癌组织标本，12例癌旁正常肺组织标本，均经病理证实。所有病人均行一侧全肺或肺叶切除手术，标本于手术切除后30分钟内置于经0.1％的二乙基焦磷酰胺(DEPC)水处理的Eppendorf管中，-80℃冰箱冷冻保存。 实验方法：RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)首先由CD44v6mRNA反转录产生cDNA单链，并以此单链为模板进行PCR扩增。在对目的基因进行RT-PCR扩增的同时，在同一体系中加入内参照基因(β-action)的引物一同扩增，扩增的内参照基因可显示整个RT-PCR体系的扩增效果。 实验过程：总RNA的提取和定量，取各部位组织标本约100mg，移入组织匀浆器中，加入600ulGIT变性液，匀浆后吸取500ul至Eppendorf管中，轻轻催打至细胞裂解。再用氯纺、异丙醇、酒精等处理提取总RNA，在紫外分光光度计下检测波长在260和280时的吸光度值A260和A280。计算提取物浓度，判定纯度，用RNA变性电泳检测其完整性。合成CD44v6mRNA上、下游引物，进行RT-PCR。产物经琼脂糖凝胶电泳，电泳后经凝胶成像分析系统摄影，用相应软件扫描PCR产物溴乙锭染色后强度。 结果： 1、CD44v6mRNA在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率为75％(42/56)，而在癌旁正常肺组织中的阳性表达率为16.7％(2/12)。二者比较，具有极显著性差异(x2=14.7247，P=0.0001)。 2、CD44v6mRNA在非小细胞肺癌男性患者的阳性表达率为79％(30/38)，女性患者阳性表达率为67％(12/18)，二者比较，无统计学意义。(x2=0.9825，P=0.3216)。 3、CD44v6mRNA在非小细胞肺癌年龄大于等于60岁患者中的阳性表达率为76.9％(20/26)，小于60岁患者的阳性表达率为73.3％(22/30)，二者比较，无统计学差异。(x2=0.095，P=0.7570)。 4、非小细胞肺癌患者癌组织CD44v6mRNA阳性表达率在腺癌中为73％(16/22)鳞癌75％(18/24)，其它类型癌80％(8/10)。三者比较无显著性差异(x21-2=0.0307,P1-2=0.8608，x21-3=0.1939,P1-3=0.659，x22-3=0.0981，P2-3=0.7541)5、非小细胞肺癌癌组织CD44v6mRNA在组织分化程度高分化、中分化、低分化各组中阳性表达率分别为80％(16/20)，73％(16/22)，71％(10/14)。三组比较，统计学无显著性差异。 (x21-2=0.3055，P1-2=0.5805，x21-3=0.3367，P1-3=0.5620，x22-3=0.0072，P2-3=0.9324)。 6、非小细胞肺癌癌CD44v6mRNA阳性表达率在PTNM分期Ⅰ+Ⅱ期为62％(18/29),Ⅲ+Ⅳ期为89％(24/27)，二者比较，差异有显著性。 (x2=5.3640，P=0.0206)Ⅲ+Ⅳ期CD44v6mRNA阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期。7、非小细胞肺癌癌组织CD44v6mRNA阳性表达率，在有淋巴结转移组90％(26/29)，无淋巴结转移组59％(16/27)。二者比较，具有显著性差异。(x2=6.8897，P=0.0087)CD44v6mRNA阳性表达率有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组。 结论： 1、非小细胞肺癌癌组织CD44v6mRNA阳性表达率与患者年龄、性别、病理类型及组织分化程度无明显关系。 2、CD44v6mRNA在非小细胞肺癌原位癌组织阳性表达率75％，而癌旁正常肺组织阳性表达率16.7％，提示CD44v6可能与非小细胞肺癌的发生有关。 3、CD44v6mRNA在非小细胞肺癌TNMⅢ+Ⅳ期阳性表达率89％明显高于TNMⅠ+Ⅱ期62％。提示CD44v6可能与非小细胞肺癌的侵袭扩散程度密切相关。 4、CD44v6mRNA在非小细胞肺癌有淋巴结转移组阳性表达率90％显著高于无淋巴结转移组59％，且多呈强阳性表达，提示CD44v6mRNA的高水平表达可能预示非小细胞肺癌发生淋巴转移。