Dectin-1与TLR2在真菌感染人角膜上皮细胞固有免疫阶段的关系

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目的:研究人永生化角膜上皮细胞(THCE)感染烟曲霉菌菌丝抗原后,THCE细胞表面Dectin-1和TLR2的表达情况,两者在固有免疫阶段的关系,及其对趋化因子的影响。方法:常规体外培养的THCE细胞为空白对照组,实验组又分为真菌刺激组和通路受体阻断组,用烟曲霉菌菌丝抗原感染体外培养的THCE细胞,建立真菌感染的THCE细胞模型,此为真菌刺激组,通路受体阻断组分别用Dectin-1阻断剂(laminarin)和TLR2中和抗体预先处理THCE细胞30分钟,后加入烟曲霉菌菌丝抗原刺激液,此为Dectin-1阻断+真菌刺激组和TLR2阻断+真菌刺激组,应用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测4h、8h、16h THCE细胞Dectin-1、TLR2、CXCL1、 CXCL8mRNA的表达;于8h、16h、24h行Western blot检测THCE细胞Dectin-1、 TLR2蛋白的表达。结果:Dectin-1、TLR2mRNA在真菌菌丝抗原刺激THCE细胞后4h表达升高,8h达高峰,真菌菌丝抗原刺激后8h组与4h、16h组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);在真菌菌丝抗原刺激THCE细胞后8h, Dectin-1、TLR2蛋白表达均升高,16h表达量达峰值。趋化因子(CXCL1、CXCL8)的升高趋势与Dectin-1和TLR2的表达趋势一致。laminarin阻断Dectin-1后,真菌菌丝抗原刺激THCE细胞8h, TLR2mRNA表达明显下降(P<0.05),而TLR2蛋白在Dectin-1被阻断后16h后,表达也相应下降(P<0.05); TLR2中和抗体阻断TLR2后真菌菌丝抗原刺激THCE细胞8h, Dectin-1mRNA表达明显下降(P<0.05),其蛋白表达量在阻断TLR2后真菌菌丝抗原刺激16h减少(P<0.05)。阻断Dectin-1与阻断TLR2受体,趋化因子(CXCL1、 CXCL8)的表达量均受到明显抑制(P<0.05)。结论:TLR2和Dectin-1共同参与了THCE细胞对烟曲霉菌菌丝抗原体的识别,两者在人角膜上皮细胞抗真菌感染固有免疫阶段存在相互作用,均引起下游趋化因子(CXCL1, CXCL8)的产生,介导角膜上皮细胞的炎症反应。
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