论文部分内容阅读
本研究以蓝浆果品种伯克利和蓝丰为材料，采用农杆菌介导法和超声波辅助农杆菌介导法，将Na+／H+反向转运蛋白AtNHX1基因和胆碱氧化酶基因codA导入伯克利和蓝丰中，以获得耐盐碱新品系。研究结果如下：1．以两个北高丛蓝浆果和一个兔眼蓝浆果品种为试材，取单芽茎段为外植体，研究影响其离体繁殖的因素，筛选适宜的离体增殖和生根培养基。试验结果表明：兔眼蓝浆果品种粉蓝在改良1／2MS+ZT3mg·L-1培养基上初代培养后成活率可达100％，培养4w后，增殖系数为2.8。北高丛蓝浆果伯克利和蓝丰品种在添加了2-ip10mg·L-1和5mg·L-1改良1／2MS培养基上的成活率分别为90％和86.7％；伯克利和蓝丰在改良1／2MS+ZT5mg·L-1培养基上继代培养4w后，增殖系数最高，分别为6.2和4.8。2．以蓝浆果品种伯克利和蓝丰的叶片为农杆菌介导转化受体，通过对gus基因瞬时表达率和转化叶片再生情况的分析，研究它们的遗传转化体系的最佳实验参数。实验表明侵染5min，共培养4d，伯克利暗处理1w，蓝丰暗处理3w，添加AS80mg·L-1，Km20mg·L-1、Cef 250mg·L-1时gus基因瞬时表达率最高。3．本实验研究了不同的超声波处理时间结合超声波处理功率，确定了侵染前一定范围内的超声波处理对农杆菌介导蓝浆果转基因有促进作用。80W功率的超声波处理2s，超声波辅助农杆菌介导AtNHX1基因转化蓝丰，能获得交稿的gus基因瞬时表达率（55％）、较高的叶片不定芽再生率（23.33％）及较低的外植体褐化率（23.67％）；100W功率的超声波处理6s，超声波辅助农杆菌介导codA基因转化伯克利的效果最好，gus基因瞬时表达率为73.33％，外植体的褐化率为22％，叶片不定芽再生率为33.08％。4．本研究将AtNHX1基因和codA基因分别通过农杆菌介导法和SAAT法转化两个蓝浆果的品种伯克利和蓝丰，均获得了具有Km抗性株系。转化AtNBX1基因的伯克利和蓝丰的抗性率分别为6.66％和2.18％；转化codA基因的伯克利和蓝丰的抗性率分别为4.24％和3.18％。转codA基因的伯克利的GUS阳性率最高，为33.33％。用GUS组织化学染色、PCR扩增方法对蓝浆果的Km抗性植株进行了检测。结果表明，codA基因已经基本整合到其中5个株系基因组中；AtNHX1基因已经基本整合到其中2个株系基因组中。