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目的:质子泵抑制剂(PPI)在临床上主要用于治疗胃酸相关性疾病,发现它也可以作为细胞毒性药物进行抗多种肿瘤的治疗。然而,PPI对肝癌的作用和相关机制研究甚少。本课题旨在探索泮托拉唑(PPZ)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制,希望能够扩展PPZ的临床适用范围到肝癌治疗。方法:(1)运用CCK-8(Cell Counting Kit-8)细胞增殖实验技术检测PPZ对肝癌细胞Huh7、SK-Hep1、Hep G2、PLC/PRF/5增殖行为的影响;(2)运用平板集落形成实验检测PPZ对SK-Hep-1细胞集落形成能力的影响;(3)运用生长曲线检测PPZ对SK-Hep-1生长活力的影响;(4)运用Edu增殖实验检测泮托拉唑对SK-Hep1、Huh7 S期中DNA合成情况的影响;(5)运用流式Annexin V-FITC/PI双染法检测PPZ对SK-Hep-1和Huh7凋亡的影响;(6)运用TUNEL实验检测PPZ对SK-Hep-1和Huh7晚期凋亡的影响;(7)运用流式细胞周期实验技术检测PPZ对SK-Hep-1和Huh7细胞周期的影响;(8)PPZ作用SK-Hep1和Huh7 24h后,运用基因芯片技术筛选出改变明显的增殖和细胞周期相关基因,并用q PCR技术进行再次验证PPZ作用SK-Hep1后这些基因在m RNA水平的表达是否和基因芯片结果一致。(9)进一步运用Western-Blot检测PPZ作用SK-Hep1后,以上筛选出的相关周期基因在蛋白水平的表达情况。结果:(1)CCK-8结果显示不同浓度的PPZ(20、40、80、160、320、640μmol/L)作用于多种肝癌细胞一定时间(24h、48h、72h)后,与对照组相比,PPZ呈剂量和时间依赖性地抑制各种肝癌细胞的增殖(p<0.05)。(2)平板集落形成实验显示,不同浓度的PPZ(20、40、80、160μmol/L)作用肝癌细胞SK-Hep-1 9天后,随着PPZ浓度的增加,肝癌细胞SK-Hep-1的集落数目和面积明显地降低(p<0.01)。(3)生长曲线实验发现不同浓度的PPZ(20、40、80、160μmol/L)作用SK-Hep-1 7天后,与对照组相比,PPZ呈剂量和时间依赖性地抑制SK-Hep-1生长(p<0.05)。(4)Edu实验显示,与对照组相比,不同浓度的PPZ(20、40、80、160μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 48h后,可以明显地抑制肝癌细胞在S期的DNA合成(p<0.05)。(5)流式Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,不同浓度的PPZ(160、320μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,可以明显地诱导肝癌细胞的早期和晚期凋亡(p<0.05)。(6)TUNEL实验发现不同浓度的PPZ(160、320μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 48h后,能够明显地诱导肝癌细胞晚期凋亡;(7)流式细胞周期实验发现,不同浓度的PPZ(160、320μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,SK-Hep-1和Huh7细胞周期明显地被阻滞在G2/M期且S期细胞百分比明显减少(p<0.05);(8)基因芯片筛选并经q PCR验证发现,PPZ作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,增殖和细胞周期相关基因PNCA、MKI67、CDK1、CDK2、CDC25C、CYCLINA2、CYCLINE2在m RNA水平表达明显下调(p<0.05);(9)Western-Blot发现,PPZ作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,细胞增殖和周期相关基因CDK1、CDK2、CDC25C、CYCLINA2、CYCLINE2在蛋白表达水平表达下调,凋亡相关的蛋白Procaspase-9表达下降,活化的caspase-9表达增加(p<0.05)。结论:PPZ能够明显地抑制肝癌细胞增殖和诱导凋亡,可能与下调增殖和细胞周期相关基因PNCA、MKI67、CDK1、CDK2、CDC25C、CYCLINA2、CYCLINE2的表达,进而使得细胞周期被阻滞在G2/M期有关。