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沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)为胡颓子科(Elaeagnus)沙棘属(Hippophae L.)植物,是一种药食兼用植物,主要分布在亚洲和欧洲,在我国已被广泛使用。沙棘不仅含有人体所必需的六大营养成分,水、无机盐、维生素、油脂、蛋白质和碳水化合物,而且含有多种生物活性成分,主要包括黄酮、生物碱、萜类等。沙棘具有抗氧化、抗疲劳、抗辐射、降血糖和降血脂等多种功能和临床应用价值。本研究以沙棘籽粕为原料,利用多种色谱方法(正相硅胶、MCI凝胶、薄层制备、半制备HPLC、HPLC等)对沙棘籽粕70%乙醇提取物中化学成分进行了系统地分离制备,并利用紫外光谱、1H-NMR和13C-NMR、HMBC、HSQC、HHCOSY、TOCSY等有机波谱分析方法及对比文献数据对分离得到的19个化合物进行结构进行鉴定,共鉴定出18个单体化合物,包括2个酚酸类化合物((2E,4E)-8-Hydroxy-2,7-dimethyldeca-2,4-dienedioic acid(1)、异香草醛(2))、2个倍半萜类化合物((6R,9R)-9-Hydrox-4,7-megastigmadien-3-one 9-O-β-Dapiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(3)、(6S,9R)-9-Hydrox-4,7-megastigmadien-3-one 9-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(4))、2个以异鼠李素为母核的黄酮类化合物(isorhamnetin3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-galactopyranoside7-O-α-L-rhamnopyanoside(5),isorhamnetin 3-O-β-Dglucoside-7-O-α-L-rhamnoside(6))、1个以槲皮素为母核的黄酮类化合物(quercetin-3-O-(4′′′′-O-E-sinapoyl)-α-rhamnopyranosyl-(1′′′→2′′)[α-rhamnopyranosyl-(1′′′′→6′′)]-β-glucopyranoside(7))和11个以山柰酚为母核的黄酮类化合物(kaempferol-3-O-β-glucopyranoside-7-O-(6-trans-feruloyl)-β-glucopyranosyl-(1→2)rhamnopyranoside(8),kaempferol-3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-galactopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside(9),kaempferol 3-(2G-rhamnosylrutinoside)(10),kaempferol-3-O-β-D-glucoside(1→2)-β-D-glucoside-7-O-(3-O-trans-sinapoyl)-α-L-rhamnoside(11),kaempferol 3-O-β-D-glucosyl(1→6)-O-β-D-glucoside(12),kaempferol-3-rutinoside,kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside(13),kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside(14),kaempferol 3-O-(2-O-β-Dglucoside)-β-D-glucoside-7-O-α-L-rhamnoside(15),Hippophandine A(17)、Hippophandine B(18)、Hippophandine C(19))。18个化合物中有4个化合物为新化合物,分别为化合物4、化合物17、化合物18和化合物19,另外化合物1、化合物3、化合物5、化合物7、化合物8、化合物9、化合物10、化合物11、化合物13、化合物14等10个化合物为沙棘属中首次分离得到。酚酸类化合物为沙棘中主要的一种活性成分。本研究建立了一种同时测定8种酚酸类化合物(没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷和异鼠李素-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷)的分析方法,并将该方法应用于沙棘叶中酚酸类化合物的测定。结果显示这8种化合物的线性范围分别为0.012-0.870μg、0.696-3.913μg、0.203-4.174μg、0.203-3.043μg、0.035-2.609μg、0.023-3.478μg、0.565-8.478μg、0.522-7.826μg(r2≥0.9992),平均回收率为93.58%-108.11%,RSDs≤1.81%。采用该方法测定的不同产地的沙棘叶中均含上述8种酚酸类化合物,但在含量方面存在差异。构建了多柔比星(Doxorubicin,Do X)体外诱导H9c2心肌细胞损伤的模型,通过观察细胞形态、MTT法检测细胞活力、Griess法检测细胞上清液NO含量、微孔板法检测上清液中LDH的含量以及利用Western blot检测促炎性介质与凋亡因子水平,明确了实验中Do X的最佳作用浓度为3μM。在此基础上建立了Do X诱导H9c2心肌细胞损伤的模型,并采用该模型对沙棘中不同类别的单体化合物的活性进行筛选与评价,MTT法检测细胞活力、Griess法检测细胞上清液NO含量、微孔板法检测上清液中LDH的含量以及利用Western blot检测凋亡因子。结果表明:三萜类化合物对Do X诱导H9c2心肌细胞损伤中,有一定的保护作用,但作用机制并不明确;酚酸类化合物中丁香酸和迷迭香酸对Do X诱导H9c2心肌细胞损伤中,在抑制细胞凋亡有保护作用,且效果迷迭香酸>丁香酸;黄酮类化合物中芦丁、槲皮素、山柰酚、异鼠李素、山奈素、表儿茶素、芹菜素、柚皮素、水仙苷、槲皮素、异槲皮苷、儿茶素、K-1、K-2和K-5等对Do X诱导H9c2心肌细胞损伤都有一定程度的保护作用。