目的:肥胖在胰岛素抵抗、2型糖尿病的发病中起关键作用,抑制食欲、增加能量消耗有利于2型糖尿病的防治。脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗为2型糖尿病患者的主要特征,也是糖尿病患者易合并心、脑血管病的主要原因。在临床治疗糖尿病时,由于胰岛素在脂肪细胞分化及糖脂代谢中的作用,临床使用胰岛素及促胰岛素分泌剂磺酰脲类药物患者出现体重增加;胰岛素增敏剂噻唑唍二酮(Thiazolidinediones,TZDs)类药物,通过激活PPARγ(Peroxisome proliferators-activated receptorsγ)转录因子,增加胰岛素敏感性的同时,诱导脂肪细胞分化,增加患者体重。现已证实葛根素可以有效改善2型糖尿病患者胰岛素的敏感性,在临床上主要作为糖尿病治疗的辅助治疗。葛根素是否对糖尿病患者体重变化有影响,目前尚不清楚,研究葛根素对糖尿病患者体重的影响情况,将为进一步阐明其治疗糖尿病的作用机制提供了依据。方法:将3T3-L1前脂肪细胞以5×10 5每孔的浓度接种于6孔培养板,一天以后可以达到融合。用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液在37℃,5%CO 2培养,待细胞融合2天后,加0.5mmol/L异丁基-甲基-黄嘌呤,0.25μg/ml地塞米松和1μg/ml胰岛素的培养液再培养48h,随后以10%胎牛血清高糖DMEM继续培养,40μg/ml浓度的葛根素在诱导的第一天开始加入培养液,直到实验结束,分化10～12天的细胞用于实验。用0.1 mg/ml油红O染色2小时,倒置显微镜下观察结果,拍摄图片。采用两步法半定量-逆转录聚合酶链反应( Reverse Transcription Polymerase Chain Response , RT-PCR )检测PPARγ2 ( Peroxisome proliferators-activated receptors 2,PPARγ2)mRNA的表达水平。细胞分空白对照组和40μg/ml葛根素组。以Trizol提取诱导分化完全的总RNA,用AMV逆转录酶把总RNA逆转录为cDNA。以琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物,用FX-MAC进行扫描分析。PPARγ2的蛋白质免疫印迹分析,DAB显色液显色,FX-MAC进行扫描分析结果。结果:一、前脂肪细胞诱导分化10天后,空白对照组细胞呈现典型的脂肪细胞表型,90%以上细胞中富含较大脂滴,而葛根素处理组,仅20～30%的细胞出现较大的脂滴,其油红O的着色明显较空白组淡。二、MTT结果显示,葛根素处理组浓度分别为10、20、40μg/ml时,MTT检测OD值分别为0.3848±0.0169、0.4105±0.0201、0.4328±0.0195,与空白对照组相比均为P<0.05,差异有统计学意义;葛根素处理组浓度为80、160μg/ml时,OD值为0.3104±0.0149、0.3201±0.0153,与空白对照组相比差异无统计学意义。三、半定量RT-PCR结果分析表明, 3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中加入葛根素,其PPARγ2mRNA的表达量明显降低,空白对照组和葛根素10μg/ml、40μg/ml处理组与内参照光密度积分值之比( puerarin/β-actin )分别为1.3866±0.02108、1.1794±0.01937、0.7765±0.01877,40μg/ml葛根素处理组与空白对照组相比P<0.05,差异有统计学意义。四、蛋白质免疫印迹结果表明,葛根素处理的3T3-L1前脂肪细胞在分化过程中,其PPARγ2蛋白质的表达量降低。结论:前脂肪细胞的增殖MTT检测结果显示低浓度葛根素可促进前脂肪细胞的增殖。油红O染色结果显示,葛根素处理组能抑制前脂肪细胞向脂肪细胞转化。半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹结果分析表明,葛根素抑制前脂肪细胞的分化,可能是由于降低其PPARγ2mRNA和蛋白的表达所致。