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本论文运用森林病理学与分子生物学的基本研究方法,利用BSA和RAPD技术,以5个黑杨派品种和白杨派的银中杨为试验材料,筛选与杨树烂皮病相关的RAPD标记。为杨树抗性育种提供一些有用信息。研究结果表明:
1.经过室外和室内的杨树烂皮病接种和病情分析,不同的树种之间的抗病性强弱表现出较大的差别。将其中表现为抗病品种的中黑防、小黑14(室外)、银中杨的单株DNA分别等量混和,获得抗病DNA池(resistancebulk)。将在抗性分析中表现为感病的品种中绥12、小×黑、小黑2000、小黑14(室内)的单株DNA分别等量混和,获得感病DNA池(susceptiblebulk)。
2.经过反复对比试验建立了适合于杨树的RAPD分析的反映体系和扩增程序,即在20μl反应体系中加入模板20ng、引物5μmol/L、dNTP20mM、Taq酶1.5U、Mg2+2.5mM,充分混匀后,94℃加热2min,使模板DNA变性,然后进入下列温度循环:94℃变性30s、35℃退火30s、72℃延伸90s,共计30个循环。循环结束后在72℃延伸7min,以保证DNA延伸彻底。
3.本研究随机选用400个10mer的随机引物进行筛选。选择其中清晰的可重复的用于RAPD分析。共筛选出16个引物,每个引物扩增的DNA片断为少的只有1条,多的达到12条,平均为6.75条,共监测出108条。其中,单态带52,平均每个引物扩增出3.25条,占49.1%,多态带56条,占51.9%,每个引物扩增出3.5条多态带。此16个引物间的检测效率相差很大,有的引物在6个品种间扩增的带全为多态带;有的在品种间扩增出完全相同的谱带,引物扩增多数集中在0.3kb~2.0kb,尤以0.6~1.5kb的片断最多。
4.对抗病池(Rb)和感病池(Sb)的扩增产物分析,发现仅有SBSS12和SBSAN17两种引物分别扩增出多态性条带与抗杨树烂皮病的基因相关。筛选出了与杨树烂皮病相关的4个RAPD标记:SBSS12-1500、SBSS12-1250、SBSAN17-850、SBSAN17-390。