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目的制定牛蒡根药材质量标准。方法依据《中国药典》2010版方法,检查牛蒡根药材杂质(沙石、泥块、尘土)、水分、总灰分、重金属铅及浸出物含量。以TLC对牛蒡根中的齐墩果酸进行定性鉴别;采用HPLC测定牛蒡根药材中绿原酸的含量;并通过精密度试验、样品稳定性试验、重复性试验、线性关系、加样回收率试验进行方法学考察。进一步调查中药牛蒡根种植、分布情况,进行植物学鉴定,总结药材性状。结果依据2010版药典不得检出杂质,水分不得过20.0%,总灰分不得过8.0%,重金属(铅)含量低于5ppm,水溶性浸出物不得少于50.0%。薄层色谱鉴别中,供试品在对照药材、对照品(齐墩果酸)色谱相应位置上均出现相同颜色的荧光斑点;HPLC精密度良好,牛蒡根提取液样品在10h之内稳定性好,重复性良好,绿原酸在0.1408μg~1.056μg范围内有良好的线性关系(y=3156924.9x-26397.4R2=0.998),平均回收率99.48%(RSD=1.34%)。结论首次制定牛蒡根药材质量标准,2011年并收录于山东省中药材质量标准,为国家标准建立奠定基础。目的培养大鼠血管平滑肌(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMCs)的原代细胞,10%胎牛血清(fetal calf serum)诱导VSMCs增殖模型,建立脂质体介导体外瞬时转染PTEN基因过表达的VSMCs细胞模型,从micro RNA-21/PTEN/PI3K/Akt/m TOR信号通路研究熊果酸(Ursolic acid)对10%胎牛血清诱导的细胞增殖的抑制作用。方法组织块贴壁法培养VSMCs原代细胞,以免疫荧光法鉴定大鼠血管平滑肌细胞,3-8代的细胞用于实验;10%胎牛血清与VSMCs共孵育24h,以复制细胞病理增殖模型;LDH法检测熊果酸对细胞的毒性作用;以CCK-8法检测细胞增殖,筛选熊果酸、PI3K抑制剂、Akt抑制剂的预给药时间;考察mi RNAihibitor特异性拮抗及UA对micro RNA-21表达,实验设计分组为:正常对照组、10%胎牛血清模型组、模型组+抑制剂组(100nmol/L mi RNAinhibitor特异性拮抗micro RNA-21作用细胞60h)、模型组+阴性对照组(100nmol/L mi RNAinhibitor negative control)、模型组+熊果酸药物组(10umol/L、20umol/L/、30umol/L/UA);采用脂质体介导的方法体外瞬时转染VSMCs细胞6h;评价UA预给药12h后VSMCs中PTEN、PI3K、Akt、m TOR蛋白表达;Westren blot检测PTEN、PI3K、Akt、m TOR蛋白表达,Real-time PCR检测micro RNA-21、PTEN基因m RNA表达。结果使用组织块贴壁法7-8天有大量细胞从边缘爬出,免疫荧光法鉴定α-SM-actin呈阳性,证明培养的细胞为大鼠血管平滑肌细胞,纯度大于98%;复制10%胎牛血清诱导的VSMCs病理增殖增殖模型,与正常组比较,10%胎牛血清孵育24h的细胞增殖率明显上升,增殖率达到430.1%;UA在浓度为10umol/L-30umol/L对大鼠VSMCs无细胞毒作用,而大于40umol/L的UA均出现细胞毒作用(P<0.05)。筛选UA预给药时间为12h,其中30umol/LUA预给药12h抑制大鼠VSMCs增殖最为明显,抑制率达73.4%,PI3K抑制剂、Akt抑制剂预给药时间分别为30min、24h,对VSMCs的抑制率分别为75.7%、69.6%,经统计学处理有均显著性差异(P<0.05);10 umol/L-30umol/L UA能剂量依赖性抑制10%胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的micro RNA-21表达,micro RNA-21拮抗剂mi RNAinhibtor(100nmol/L)作用VSMCs 60h后,Real-time PCR检测micro RNA-21表达降低,而此时PTEN基因的m RNA、蛋白水平均较模型组升高(P<0.05),结果提示micro RNA-21参与VSMCs增殖且负调控PTEN。脂质体瞬时体外转染大鼠血管平滑肌细胞PTEN基因6h,倒置荧光显微镜观察转染效率约为56%,并呈现绿色荧光,证明脂质体成功携带质粒进入VSMCs,此时检测PTEN基因蛋白高表达,且PI3K基因蛋白水平亦降低,二者均具有显著性差异(P<0.05),说明PTEN是PI3K的上游。在实验剂量下的UA能促进10%胎牛血清诱导的VSMCs增殖后PTEN蛋白表达,与PTEN蛋白低表达的模型组比较具有量效关系,数值有统计学差异(P<0.05),结果提示UA能抑制PTEN异常表达。LY290042(20umol/L)特异性拮抗PI3K基因24.5h,MK206(3umol/L)特异性拮抗Akt基因48h,Akt蛋白、m TOR蛋白水平表达明显降低,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05),分析在大鼠血管平滑肌细胞中存在该通路。在10 umol/L-30umol/L UA预给药12h可剂量依赖性抑制10%胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌增殖后PI3K基因、Akt基因、m TOR基因蛋白水平的表达,与高表达的模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);结论复制10%胎牛血清24h诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖病理模型,大于40mol/L的UA对VSMCs有细胞毒性作用。10-30umol/L的UA通过micro RNA-21/PTEN/PI3K/Akt/m TOR信号通路抑制VSMCs的增殖,呈量效关系。micro RNA-21负调控PTEN基因,且PTEN基因负调控PI3K/Akt/m TOR信号通路。