基于核酸适配子的肝癌分子分型研究

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背景与目的:核酸适配子是通过SELEX技术从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选出的单链寡核苷酸配体,能与相应的靶分子高特异性、高亲和力结合,在疾病的诊断和治疗中显示出良好的应用前景。分子分型是以疾病的分子特征为基础的新分类体系,在个体化诊断与治疗中具有重要意义。本研究组在前期工作中,利用肝癌血清筛选出一组对肝癌具有良好诊断价值的适配子。本研究利用肝癌血清标本的适配子检测结果,探索基于核酸适配子的肝癌分子分型的可行性及其价值。方法:前期工作中使用13个肝癌血清核酸适配子检测了325例确诊的肝癌血清标本,获取各适配子游离带综合灰度指标。查阅病案资料,收集所检测肝癌患者的临床资料,包括人口学资料、病因学资料、实验室检测结果、影像学检查结果。采用Pearson相关分析观察13个适配子检测结果之间的相关性,采用Ward最小方差法、欧式距离平方和对适配子进行指标聚类,采用Spearman相关分析观察适配子与肝癌患者临床资料之间的相关性分析,采用两步聚类法以适配子检测结果为指标对肝癌进行样品聚类,通过卡方检验、t检验和/或方差分析比较各肝癌亚类的临床指标差异,使用SPSS13.0软件进行统计学处理。结果:(1)13个适配子之间多数相关性较弱,相关系数在0.2~0.5之间,少数适配子间无或有明显相关性;聚类分析可将适配子聚成4类。(2)13个适配子与肝癌的部分临床及实验室指标存在一定的相关性,且各适配子之间有一定的差异:8个适配子与肝癌患者是否有肝硬化背景相关,7个适配子与肝功能状态相关,7个适配子与INR相关,6个适配子与肝癌的肿块大小相关,6个适配子与PLT数量相关,4个适配子与TBIL水平相关,4个适配子与血清Cl-水平相关,3个适配子与WBC数量有关,3个适配子与BUN相关,其他还有个别适配子与AST、GGT、AKP、MELD分级、年龄、ALB、TG、HDL、APTT等相关。(3)以各适配子分别进行肝癌聚类,可将肝癌聚为2~4类,类间部分临床及实验室指标存在差异,且适配子之间有差异的指标不完全相同:8个适配子的肝硬化背景、7个适配子的癌肿大小、7个适配子的肝功能状态、7个适配子的PLT计数、6个适配子的INR、5个适配子的血清Cl-水平、3个适配子的AKP、3个适配子的ALB、3个适配子的血清K+水平、3个适配子的RBC数量、2个适配子的TBIL水平、2个适配子的GGT、2个适配子的MELD分级、2个适配子的年龄、2个适配子的TP、2个适配子的HDL、2个适配子的血清Ca2+水平、2个适配子的WBC数量、2个适配子的PT在类间比较有差异。其他还有个别适配子在性别、CA19-9、ALT、AST、BUN、TG、血清Na+水平、Hb、APTT的类间比较有差异。结论:(1)13个肝癌血清核酸适配子之间相关性较弱,能明确地聚成4类,提示它们所针对的肝癌血清中的靶标存在差异;(2)13个肝癌血清核酸适配子与肝癌的部分临床及实验室指标存在一定的相关性,提示它们可以在一定程度上反映肝癌的临床特点;(3)以13个肝癌血清适配子分别进行肝癌聚类,类间部分临床及实验室指标存在差异,能区分不同的病情,提示基于适配子的肝癌分子分型具有一定的临床价值;(4)13个肝癌血清适配子在与临床及实验室指标的相关性及在肝癌聚类的类间特点方面存在差异性,提示本组适配子可以从不同侧面反映肝癌的临床特点。
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