【摘 要】
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原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤,接受根治性切除的病人,5年复发率约为70%。肝癌患者预后不良的重要原因就包括肝癌治疗后的复发。肝细胞癌对大多数抗癌药物敏感性较差,大多数疗效约在10%至20%之间。因此,找寻一种疗效好毒性低的药物或能增强化疗药物疗效并且降低其使用量的药物,具备非常重要的研究意义和实践价值。S-烯丙基半胱氨酸是大蒜提取物中的主要活性成分之一,近年来研究表明其具有显著抑制肿瘤的效果。本
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原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤,接受根治性切除的病人,5年复发率约为70%。肝癌患者预后不良的重要原因就包括肝癌治疗后的复发。肝细胞癌对大多数抗癌药物敏感性较差,大多数疗效约在10%至20%之间。因此,找寻一种疗效好毒性低的药物或能增强化疗药物疗效并且降低其使用量的药物,具备非常重要的研究意义和实践价值。S-烯丙基半胱氨酸是大蒜提取物中的主要活性成分之一,近年来研究表明其具有显著抑制肿瘤的效果。本篇论文通过体外试验研究SAC联合5-Fu对Hep G2细胞增殖能力的影响及相关的分子机制。[目的]研究S—烯丙基半胱氨酸和5-FU单用及联用对肝癌Hep G2细胞增殖抑制的效应及其分子机制。[方法]1.对Hep G2细胞存活率影响的研究:体外培养肝癌细胞,在通过CCK8实验确认SAC和5-Fu单用及联用对Hep G2细胞存活率的影响。2.对细胞凋亡的影响的研究:通过流式细胞仪检测和在倒置显微镜下观察SAC和5-Fu单用及联用对Hep G2细胞存在的促进凋亡的影响。3.Western blot实验检测SAC和5-Fu联用及单用对Hep G2细胞中的抑凋蛋白Bcl-2和Bcl-XL两种蛋白表达量的变化。[结果]1.在SAC和5-Fu单用和联用对Hep G2细胞的增殖抑制的实验中:（1）与对照组相比,SAC和5-Fu单用组以及联用组的Hep G2细胞存活率较低,且随着药物浓度的增加,该作用更加明显。（2）SAC和5-Fu联用时Hep G2细胞存活率较两药单用时低。（3）通过中效原理及公式计算SAC和5-Fu单用的中效浓度分别为289.14umol/L 和 20.571umol/L。41umol/LSAC 和 5-Fu 联用时,5-Fu 中效浓度为10.798umol/L。通过计算细胞抑制率为50%时的联合指数CI=0.667<1,提示SAC与5-Fu联用时对Hep G2细胞的增殖抑制有协同作用。2.倒置相差显微镜下观察Hep G2细胞的形态:SAC联合5-Fu组较SAC和5-Fu单用组相比,漂浮的死亡细胞明显增多,说明了联合组的抑制增殖作用更强。3.流式细胞术检测的结果为:SAC和5-Fu联合组细胞凋亡率为50.8%:5-Fu祖细胞凋亡率为30.75%;SAC组凋亡率为16.563%;对照组细胞凋亡率为2.453%。表明联用组和单用组通过诱导细胞凋亡,从而抑制Hep G2细胞的增殖。4.Western blot结果示:SAC和5-Fu联用及单用能降低Bcl-2和Bcl-XL两种蛋白的表达水平。对照组的Bcl-2和Bcl-XL的灰度值分别为1.435±0.311和1.789±0.336;SAC 组的 Bcl-2 和 Bcl-XL 的灰度值分别为 1±0.206 和 1.214±0.203;5-Fu 组的 Bcl-2 和 Bcl-XL 的灰度值分别为 0.599±0.191 和 0.894±0.103;SAC和5-Fu联用组的Bcl-2和Bcl-XL的灰度值分别为0.279±0.105和0.537±0.041。结果表明,SAC与5-Fu联用对降低Hep G2细胞中Bcl-2、Bcl-XL两种蛋白表达的影响比单用组更为明显。[结论]1、SAC对5-fu诱导Hep G2细胞的增殖抑制具有协同作用。2、SAC和5-Fu联用诱导Hep G2细胞凋亡,导致细胞增殖受到抑制。3、SAC和5-Fu联用比单用减少Bcl-X和Bcl-2蛋白在Hep G2细胞中的表达作用更明显,以此来发挥协同抑制作用。
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