番茄中茉莉酸与其他激素信号的相互作用研究

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番茄(Solanum lycopersicum)是最重要的蔬菜作物之一,随着番茄遗传学研究和国际茄科基因组计划(International Solanaceae Genomics Project,SOL)的发展,番茄已成为研究植物激素相互作用的理想模式植物。茉莉酸(jasmonic acid,JA)作为一种新型的植物内源激素,既是植物生长发育的调节因子,又在植物对逆境的适应性中发挥重要作用,因而受到研究者广泛的关注。本文以转基因番茄和激素相关突变体为试材,研究了番茄中系统素/茉莉酸(systemin/JA)与油菜素甾醇类(Brassinostsroids,BRs)信号转导途径的相互作用,并研究了JA与其他激素途径在茎枯病抗性以及AAL-toxin诱导的细胞程序化死亡(prograrnmedcell death,PCD)中的作用。所取得的主要结果如下:1、建立了番茄转基因体系,将拟南芥中BR信号转导组分基因bzr1和bes1转入番茄中。通过PCR检测共获得5株bzr1和3株bes1阳性植株,RT-PCR分析表明,阳性植株中均有目的基因的表达。转基因植株均能正常生长结实,对获得的转基因后代进行遗传特性分析,结果表明3个bzr1转基因株系和1个bes1转基因株系中Kan抗性植株与敏感植株分离比符合3:1,表明这3个bzr1株系是单拷贝插入,1个bes1株系是单拷贝。2、以bzr1转基因植株为材料,对BR反应进行了分析。结果显示,在光照和黑暗条件下,BR处理转基因植株后下胚轴和根长度的变化与野生型变化一致,但是转基因植株中提高了BR生物合成基因Dwarf以及BR调节基因LeBR1的表达。MeJA处理dx,bzr1转基因植株以及野生型后,JA响应基因PI-Ⅱ的表达变化一致。与对照中蔬四号相比,bzr1转基因植株中JA生物合成基因(LOXD,OPR3和AOS2)的表达也没有明显差异。光照条件下,不同浓度的BL处理systemin/JA突变体(spr1,spr2和def1)及其野生型后,其根长变化趋势一致。黑暗条件下,BL及其抑制剂BRZ处理systemin/JA突变体(spr1,spr2和def1)后,其根和下胚轴长度变化与野生型相比没有明显差异。10-7M的BL处理systemin/JA突变体后分析了BR调节基因Dwarf和LeBR1的表达,结果显示,与野生型相比,突变体中BR调节基因表达变化一致。以上结果表明,systenmin/JA伤信号与BR被膜受体感知后,在细胞质中的转导途径之间可能没有相互作用,而是拥有完全不同的下游组分来调节基因的表达和特定的生理反应。3、利用JA突变体(spr2,def1和jai1),研究了JA生物合成和信号转导途径在番茄对链格孢菌(Alternaria alternata f.sp.lycopersici,AAL)引起的茎枯病的抗性中的作用机制。结果表明,JA能够提高番茄对茎枯病的抗性,但JA受体COI1对AAL感病是必需的。利用qRT-PCR分析了AAL真菌侵染jai1及其野生型后JA生物合成酶基因(LOXD和AOS2)以及水杨酸(Salicylic acid,SA)生物合成(PAL)和信号转导途径基因(LeNPR1和PR基因)的表达,结果表明:jail提高对AAL的抗性并不是由于提高了JA含量,也不是由于增强了SA的生物合成和信号转导途径。利用乙烯抑制剂1-MCP和乙烯过量产生突变体Epi,分析了乙烯在茎枯病抗性中的作用,结果表明乙烯提高了对AAL真菌的敏感性。利用qRT-PCR分析了AAL侵染jail及野生型后乙烯生物合成(LeACO1和LeACS4)及信号转导途径中一些基因(LeETR1,LeETR3和ERF1)的表达,结果显示:与野生型相比,AAL真菌侵染jail后明显抑制了乙烯生物合成和信号转导途径。在以上研究基础上提出了JA、SA及乙烯“对话”(cross-talk)在番茄对链格孢菌抗性中的作用的模式图。4、利用JA突变体(spr2,def1和jai1),研究了JA生物合成和信号转导途径在AAL-toxin诱导的细胞程序化死亡中的作用。结果表明,JA缺失突变体(spr2和defl)增强了AAL-toxin诱导的PCD,而JA非敏感突变体jail降低了AAL-toxin诱导的PCD。研究了SA和乙烯在AAL-toxin诱导的PCD中的作用,结果显示,SA抑制而乙烯促进AAL-toxin诱导的PCD。基因表达结果表明,jai1降低PCD并非是通过提高SA途径来实现的,可能与乙烯反应以及过氧化氢的代谢有关。
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