羊栖菜的化学成分及生物活性研究

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羊栖菜及其提取物具有抗氧化、降血脂、抗肿瘤、降血糖等功效,本研究对该植物的化学成分进行研究,主要分四个部分。一、通过不同极性的有机溶剂对羊栖菜进行提取,并对其体外蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性进行评价。二、通过GC-MS对石油醚部位和乙酸乙酯部位的化学成分进行分析鉴定。采用硅胶柱层析和凝胶色谱对无水乙醇部位进行研究。三、挥发油的提取及分析,结合分子对接技术对提取物中具有PTP 1B抑制活性的化合物进行研究。四、采用高速逆流色谱对无水乙酸乙酯部位化学成分进行研究。以1300g羊栖菜为原料,不同溶剂进行提取最终得到六个不同的极性部位,分别是石油醚部位(1.4g)、乙酸乙酯部位(7.9g)、无水乙醇部位(31g)、50%乙醇部位(283.6g)、50%乙醇部位的上清(33.4g)和沉淀(203.6g),提取率分别为0.11%、0.61%、2.4%、21.8%、2.6%、15.7%。经过PTP 1B抑制活性的测定,上述提取物的IC50值分别为2.00±0.34、0.37±0.07、1.96±0.26、1.27±0.29、1.62±0.31、0.99±0.19μg/mL。石油醚部位和乙酸乙酯部位通过GC-MS分离分析,分别检测鉴定了16个和14个化合物。石油醚部位中的主要化学成分为正十六烷酸,乙酸乙酯部位为1,2-苯二甲酸二丁基酯。无水乙醇部位进行硅胶柱层析分离,得到45个不同极性段,再进行凝胶柱分离,得到一个单一化合物。1500g羊栖菜提取4h获得44.0mg挥发油,提取率为0.03%,通过GC-MS鉴定了10个化合物,含量最多的是化合物10(棕榈酸,34.61%)。对样品进行烷基化衍生,最终鉴定了26个化合物,含量最多的是化合物36棕榈酸(40.781%)。分子模拟对接结果显示化合物9(N-(4-(二乙基氨基)苯基)乙酰胺)与PTP 1B对接的结合能最低,为-5.06 k J/mol,具有抑制PTP 1B的潜质。采用高速逆流色谱法对乙酸乙酯部位中的化合物成分进行了研究,溶剂系统为乙酸乙酯:正丁醇:水(2:3:5,v/v),流速为2ml/min,转数为800 rpm。从400mg乙醇部位中分离5个峰,质量分别为4.51 mg、2.12 mg、4.46 mg、2.15 mg、3.12 mg,分离时间为220min,经高效液相色谱检测纯度分别为70%、93%、90%、94%、95%。在50℃下减压浓缩后,化合物变性,纯度分别降低为60%、75%、80%、74%、76%。
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