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目的:研究miR-204与RAB22A在胃癌(Gastric carcinoma,GC)中的表达情况,探讨miR-204与RAB22A之间的靶向调控关系,在细胞水平和动物水平上探讨miR-204与RAB22A对胃癌生物学行为的影响。方法:1.收集115例配对癌组织、癌旁组织及术前术后血液,50例正常胃粘膜组织及血液,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法,检测上述组织和血液中miR-204和RAB22A的表达情况,采用相关性分析的方法,研究miR-204表达水平与胃癌患者临床病理学参数、预后之间的相关性。2.将人胃癌细胞系(SGC7901细胞、GC981细胞、HGC-27细胞、MGC803细胞与N87细胞)和人正常胃粘膜细胞(GES-1细胞)作为细胞水平的研究对象,qRT-PCR及免疫印迹(Western Blotting,WB)技术,检测胃癌细胞系中miR-204与RAB22A的表达情况。采用psi-CHECK质粒构建RAB22A 3’-UTR的质粒及其突变质粒,应用凝胶电泳和测序的方法对构建的质粒进行鉴定,双荧光素酶报告系统验证miR-204与RAB22A之间的靶向调控关系。3.通过设立NC组、miR-204组、RAB22A组和miR-204+RAB22A组四组,采用MTT与细胞克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室实验与细胞粘附实验,检测miR-204与RAB22A对GC细胞增殖、细胞周期与细胞凋亡、细胞迁移、侵袭及粘附的影响。4.采用裸鼠成瘤实验,检测miR-204与RAB22A对GC肿瘤形成的影响。结果:1.胃癌患者术前血清中miR-204的相对表达量为0.67±0.38,术后1周血清中miR-204的相对表达量为1.15±0.42,健康受试者血清中miR-204的相对表达量为1.26±0.45,胃癌患者术前血清中miR-204的相对表达量明显低于健康受试者和术后1周患者,差异有显著性(P<0.05)。2.胃癌患者癌组织中miR-204的相对表达量为0.63±0.45,健康受试者胃黏膜组织中miR-204的相对表达量为2.58±0.72,癌旁组织的miR-204的相对表达量为2.41±0.93,癌组织中miR-204相对表达量明显低于健康受试者和癌旁组织,差异有显著性(P<0.05)。3.Hp阳性胃癌患者的血清中miR-204的相对表达量为0.51±0.09,Hp阴性胃癌患者miR-204的相对表达量为0.89±0.15,在癌组织样本中,Hp阳性患者的miR-204的相对表达量为0.41±0.06,Hp阴性胃癌患者的miR-204的相对表达量为0.78±0.18,Hp阳性的胃癌患者血清和癌组织中miR-204相对表达量明显低于Hp阴性胃癌患者,差异有显著性(P<0.05)。4.miR-204相对低表达组的胃癌患者5年的存活率为34.43%,miR-204相对高表达组的5年的存活率为57.41%,miR-204相对低表达组的胃癌患者5年存活率显著低于miR-204相对高表达水平组,差异有显著性(P<0.05)。5.miR-204在胃癌中的低表达与胃癌患者的淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期及患者预后密切相关,与性别、年龄、肿瘤大小无相关性。6.尽管对于不同胃癌患者,RAB22A在肿瘤组织及癌旁组织中的表达量有显著差别,对于每一个胃癌患者自身,其肿瘤组织中RAB22A的表达量显著高于其癌旁组织,差异有显著性(P<0.05)。7.在正常的胃组织细胞GES-1中,miR-204的相对表达量为2.72±0.81,在SGC7901细胞系中,miR-204的相对表达量为0.43±0.13;在GC981细胞系中,miR-204的相对表达量为0.72±0.32;在HGC-27细胞系中,miR-204的相对表达量为0.35±0.06;在MGC803细胞系中,miR-204的相对表达量为0.31±0.12;在N87细胞系中,miR-204的相对表达量为0.75±0.18。与人正常胃黏膜细胞GES-1相比,胃癌细胞系中miR-204的表达量显著下降,RAB22A无论在信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)水平还是蛋白水平,表达量均显著上升,差异有显著性(P<0.05)。8.在TargetScan中找到miR-204与RAB22A 3’-UTR之间的互补位点,双荧光素酶报告体系显示,miR-204与RAB22A-WT共转染时,荧光强度(1.618±0.0774)较Blank质粒与RAB22A-WT共转染时的荧光强度(4.17166±0.1664)显著降低(P<0.01),miR-204与RAB22A之间存在潜在的靶向调控关系。9.MTT与细胞克隆形成实验,RAB22A组的OD曲线显著高于对照组,miR-204组的OD曲线显著低于其余三个组别,miR-204组的平板被结晶紫染成紫色的克隆为14±0.82,在RAB22A组的平板被结晶紫染成紫色的克隆为60.33±0.47,过表达miR-204显著抑制SGC7901细胞的生长能力,过表达RAB22A显著增强SGC7901细胞的生长能力。10.流式细胞术及WB结果表明,过表达miR-204促使SGC7901细胞在G1期显著滞留,显著促进SGC7901细胞凋亡,而过表达RAB22A使SGC7901细胞快速从G1期进入S期,显著抑制SGC7901细胞凋亡。11.Transwell小室实验与细胞粘附实验结果显示,miR-204组的细胞迁移数量为49.17±6.31个,RAB22A组的细胞迁移的数量为340.67±28.74个,miR-204组的细胞侵袭数量为28.5±6.02个,RAB22A组的细胞侵袭数量为166.17±11.75个,miR-204组的细胞粘附率为0.200±0.08%,RAB22A组的细胞粘附率为0.950±0.09%,相对NC组和miR-204+RAB22A组,miR-204组的细胞迁移数量、细胞侵袭数量、细胞粘附率明显降低,RAB22A组的细胞迁移数量、细胞侵袭数量、细胞粘附率明显升高,差异有显著性(P<0.01)。12.裸鼠成瘤实验结果显示,接种miR-204-SGC7901细胞的裸鼠形成的移植瘤体积、重量显著下调,接种RAB22A-SGC7901细胞的裸鼠形成的移植瘤体积、重量显著上调。结论:1.miR-204在胃癌中呈低表达,与胃癌患者淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期、预后密切相关,RAB22A在胃癌中呈高表达,两者在GC疾病进展中可能发挥着重要的作用2.miR-204可能靶向结合RAB22A 3’-UTR,负向调控RAB22A,发挥抑癌基因的作用。3.miR-204与RAB22A通过调控细胞生长、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移、细胞侵袭与细胞黏附等方面可能在GC的形成过程中发挥重要作用。