结直肠癌中microRNA-150的表达与p21、p27的关系及其对细胞增殖的影响

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目的:结直肠癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一,统计分析报告显示其在常见癌症中位居第三,发病率及病死率呈日益增高的趋势。结直肠癌是多种因素、多个基因相互作用逐步发展的结果,但其具体的发生发展机制尚不完全明确。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA,其通过转录后水平调节mRNA的翻译或降解,从而调节多种基因的表达,并参与调控细胞的增殖、凋亡及分化。有研究显示miR-150异常表达和功能失调在肿瘤发生、感染及自身免疫性疾病等多种病理生理状态下可发挥重要作用,本课题组前期研究发现miR-150在结直肠癌组织中低表达。抑癌基因p21、p27被认为是细胞周期调控的重要负性调控因子,与肿瘤的发生、发展有关。通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time qRT-PCR)的方法检测结直肠癌患者组织中miR-150、p21和p27的表达,并对三者的相关性进行分析,同时用CCK-8法研究上调miR-150对结直肠癌细胞增殖活性的影响,为深入了解结直肠癌发病机制提供理论依据。方法:1收集35例2012年9月~2013年9月来自河北医科大学第一医院和河北医科大学第四医院结直肠癌手术标本。每例标本分别取自结直肠原发肿瘤组织及上(下)切缘正常黏膜且术后病理证实无癌组织侵犯的癌旁组织。新鲜标本离体后迅速置于液氮中,于-80℃保存。35名患者术前未接受任何化疗和放疗。2选取结直肠癌细胞株HCT116进行细胞培养。3应用RT-PCR方法检测35例结直肠癌组织及对应结直肠正常黏膜组织中miR-150、p21和p27的表达水平,分析三者表达相关性,并分析miR-150、p21和p27的表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。4对HCT116细胞进行miR-150转染,将转染miR-150模拟物组作为实验组,将转染无义寡核苷酸组作为对照组。5HCT116细胞进行细胞转染后1、2、3、4、5d,分别应用CCK-8法检测5个时段的OD值,绘制细胞生长曲线,观察对照组和实验组间细胞增殖改变情况。6采用SPSS13.0统计软件,对实验结果进行分析,计量资料以中位数(四分位数)表示,两组间配对样本采用非参数检验、Spearman相关分析,以P<0.05表示差异存在有统计学意义。结果:1miR-150在35例结直肠癌组织中表达量0.071(0.031,0.129),正常黏膜组织中表达量0.336(0.168,0.817),可见miR-150在癌组织中的表达明显低于正常黏膜组织中的表达(P<0.05),差异有统计学意义。2p21在35例结直肠癌组织中表达量0.007(0.003,0.083),正常黏膜组织中表达量0.036(0.012,0.164),可见p21在癌组织中的表达明显低于正常黏膜组织中的表达(P=0.013),差异有统计学意义。3p27在35例结直肠癌组织中表达量0.016(0.001,0.048),正常黏膜组织中表达量0.023(0.002,0.063),可见p27在癌组织中的表达低于正常黏膜组织中的表达(P=0.340),但差异无统计学意义。4在结直肠癌组织中miR-150与p21存在相关性(rs=0.434,p=0.009);miR-150与p27不存在相关性(rs=0.033,P=0.855)。5miR-150、p21和p27的表达与结直肠癌患者临床病理特征均无关(P>0.05)。6HCT116细胞转染miR-150后1、2、3、4、5d,通过CCK-8法检测各组细胞增殖情况,结果显示:miR-150可以明显抑制结直肠癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P<0.0001)。结论:1miR-150在结直肠癌中低表达,提示其可能对结直肠癌具有抑癌作用。2p21在结直肠癌中低表达,提示其可能对结直肠癌具有抑癌作用。3miR-150可能通过抑制结直肠癌细胞的增殖,发挥抑癌作用。4miR-150与p21之间可能存在正向调节的环路,相互促进发挥抑制结直肠癌细胞增殖效应。
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