他克莫司对嘌呤霉素损伤足细胞的保护作用研究

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目的观察他克莫司对嘌呤霉素诱导的足细胞损伤的影响,探讨他克莫司通过调节足细胞自噬,发挥保护足细胞作用的研究。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,嘌呤霉素作用足细胞建立足细胞损伤模型,实验分为空白组、溶媒组、模型组和FK506组。处理12h、24h和48h后,显微镜下观察足细胞形态并拍照,CCK-8(cell counting kit-8)法检测足细胞活力,western blot检测LC3蛋白以及Nephrin蛋白表达量。结果1.细胞形态及数目改变:在12h、24h、48h时间点,溶媒组与空白组比较,细胞面积及数目基本一致。模型组与空白组比较,各时间点细胞面积及数目均减少。FK506组各时间点细胞面积及数目均高于模型组。2.细胞活力改变:处理48小时后,溶媒组与空白组比较,足细胞活力无明显差异(P>0.05)。模型组与空白组比较,足细胞活力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。FK506组足细胞活力明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.蛋白表达改变:处理48小时后,western blot检测各组足细胞相关蛋白,溶媒组LC3以及Nephrin蛋白表达量与空白组基本一致,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组Nephrin蛋白表达较空白组减少,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。FK506组对比模型组,Nephrin蛋白表达增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FK506可以增加足细胞Nephrin蛋白表达,减轻PAN(嘌呤霉素)所致的足细胞损伤,其机制可能与上调足细胞自噬有关。
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