论文部分内容阅读
目的:修订万年蒿吉林省地方药材标准,建立万年蒿药材指纹图谱,结合模式识别对万年蒿药材进行质量评价及同属药材艾叶、青蒿、茵陈的鉴别。方法:对采集的20批万年蒿药材采用DIVA-GIS绘图软件,根据万年蒿样本信息,绘制吉林省万年蒿药材地理分布图;采用显微法及薄层色谱法对万年蒿药材进行定性鉴别研究;依据《中国药典》2015年版四部通则对万年蒿药材进行检查项及浸出物的测定研究;采用HPLC法,以东莨菪内酯为测定指标,建立含量测定方法并进行方法学考察,并制定限度;采用HPLC对20批万年蒿药材进行检测,建立万年蒿药材HPLC指纹图谱,以中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析;以指纹图谱共有色谱峰的峰面积为变量,采用SPSS 22.0软件,对20批万年蒿药材进行聚类分析（HCA）和主成分分析（PCA）,建立20批万年蒿药材聚类树状图,并以主成分的特征值及贡献率为依据,计算主成分综合得分,对各批万年蒿药材质量进行综合评价;采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,计算18批同属药材艾叶、青蒿、茵陈与万年蒿对照指纹图谱相似度;采用SPSS 22.0软件,对20批万年蒿药材及18批同属药材进行聚类分析;采用SIMCA14.0软件,对20批万年蒿药材及18批同属药材进行主成分分析、正交偏最小二乘-判别分析,对万年蒿及蒿属药材艾叶、青蒿、茵陈进行分类鉴别,寻找同属药材分类的主要贡献峰。结果:通过绘制的万年蒿地理分布图,确定万年蒿药材在吉林省地理分布经纬度跨度较广,其在吉林省属于广泛分布品种。明确了万年蒿药材的性状及粉末显微特征,建立了万年蒿中香豆素类成分东莨菪内酯及挥发性成分的薄层色谱鉴别方法,该方法快捷简便,专属性强,耐用性良好。综合比较分析各批万年蒿药材样品的检测数据,拟订了其检测限度,暂定水分不得过13.0%;总灰分不得过8.0%;酸不溶总灰分不得过2.0%;浸出物不得少于20.0%。以东莨菪内酯为指标性成分,测得不同批次万年蒿药材中东莨菪内酯的含量范围为0.069%0.302%。暂定按干燥品计,含东莨菪内酯(C10H8O4)不得少于0.060%。建立了不同批次万年蒿药材HPLC指纹图谱,采用相似度软件标定了10个共有峰,其中用东莨菪内酯对照品指认了其中1个共有峰;20批万年蒿药材的相似度在0.8300.998,各批药材样品间质量存在差异。聚类分析结果与相似度结果之间有一定的关联性,可分为三类,相似度较接近的万年蒿样品聚为一类。结合PCA主成分因子得分构建了万年蒿综合评价函数为:F=0.47852F1+0.19530F2+0.11841F3,对20批万年蒿药材综合得分进行排序,S10药材样品主成分因子综合得分最高,样品S19和S8的综合得分最低。相似度分析表明,可通过相似度分析对青蒿与万年蒿进行区分,而艾叶和茵陈与万年蒿对照指纹图谱相似度存在重叠,仅从相似度上难以将它们与万年蒿区分。采用聚类分析时,四种蒿属药材样品被聚为5类。青蒿、茵陈、艾叶各自聚为一类,20批万年蒿被聚为两类,相似度数值处于较低水平的万年蒿药材被单独聚为一类。两两分组进行PCA分析时,各组间均能较好的分离,说明具有组间差异。OPLS-DA分析结果表明,万年蒿与同属各药材艾叶、青蒿、茵陈均在7号峰有差异,最终获得7号色谱峰为主要差异性标志物。结论:通过对万年蒿药材质量标准的系统化研究,完善了万年蒿药材性状、性味归经、功能主治的描述,增加了万年蒿药材粉末显微鉴别、薄层色谱鉴别、含量测定、水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物等项目,修订了1977年版万年蒿药材质量标准。基于指纹图谱技术结合主成分分析及聚类分析等方法,建立了万年蒿药材质量评价模式。通过指纹图谱多指标模式识别分析方法,开展了万年蒿与蒿属药材青蒿、艾叶及茵陈的模式识别研究,明确了它们的差异性成分,为万年蒿及其同属药材品种的分类鉴定提供了参考依据。