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花椒是我国重要的经济树种之一,具有巨大的经济价值和药用价值,由于人们对生活水平高质量的追求,花椒产品逐步多样化,这促使了花椒产业结构不断的升级,花椒在市场销售的品种已经难以满足当前市场发展的需要,花椒种质资源创新和良种繁育是解决该问题的重要途径之一。目前花椒的遗传改良以传统的自然选育和杂交为主,但由于花椒属于无融合生殖植物,导致花椒种质创新的工作周期长且效率低。体细胞杂交技术能扩大遗传重组范围,提高种质创新的工作效率,在应用于育种的实践中具有很大的应用价值。体细胞杂交的应用必须以高效的原生质体培养为前提。原生质体培养技术不仅能创造新的种质材料,而且在促进体细胞杂交在花椒的遗传改良中的应用具有重要意义。为了开展花椒原生质体培养技术的研究,本文以韩城大红袍花椒为材料,开展了3方面研究工作:第一,花椒成熟种胚离体培养的初步探究;第二,花椒原生质体分离技术的优化;第三,花椒原生质体培养技术体系的研究。主要研究结果如下:1.成熟种胚离体培养的初步探究以韩城大红袍花椒成熟种胚为试验材料,研究了花椒成熟种胚离体培养条件。采用75%酒精消毒30s和0.1%升汞消毒7min是花椒最适的消毒时间组合,无菌种胚获得率最高可达到75.22%。由愈伤组织诱导不定芽的分化培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 NAA,诱导率最高达到65.44%。不定芽的增殖培养基为MS+0.1 mg·L-1 IBA+0.5mg·L-1 6-BA,平均苗高达3.1cm,增殖系数为3.6。生根培养基为0.5mg·L-1 IBA+1/4MS,生根率最高可达92%。2.花椒原生质体的分离与纯化以韩城大红袍花椒叶片为试验材料,利用酶解法分离原生质体,通过试验分别研究预处理、叶龄和叶片位置及苗龄对花椒原生质体分离的影响。结果表明:低温预处理后原生质体剥离的效果要优于没有预处理或者其他预处理方法,叶龄在15d至60d之间的无菌苗叶片均适合于制备原生质体,原生质体产量均可达1×106个·mL-1,活力可达80%以上。苗龄在35d的无菌苗最适于花椒原生质体分离。3.花椒原生质体的培养以花椒叶片分离出的原生质体为试验材料,研究了培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明:分离纯化后的花椒原生质体在WPM+0.5mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培养效果较好,最适花椒原生质体培养方式是液体培养方式,最佳的培养密度为1×105个·mL-1,培养第3天原生质体第一次分裂,2周分裂3-5次,原生质体在28天后形成微细胞团,培养60天后可形成了直径为2mm左右的愈伤组织,此次试验共获得2316个直径为2mm的愈伤组织。在愈伤组织增殖培养上,2316个直径为2mm愈伤组织仅有22个增殖到直径5mm,转入到在MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 NAA分化培养基中,培养40d后有4个愈伤组织分化出不定芽,每个愈伤组织都分化出1个不定芽,总共分化出4个不定芽,其中2个不定芽是畸形的,没有叶的分化。