癌症作为全球第二大死因,严重威胁全人类的生命健康,已变成急需攻克的难题之一。当前,关于肿瘤医治的方式主要有三种,包括:化学药物疗法(化疗)、放射疗法(放疗)和手术治疗方法(手术)。其中,放疗和手术均无法消灭转移的病灶,而化疗药物入血,理论上可以抵达身体各处,杀死转移的肿瘤细胞,因此,化疗仍然是肿瘤治疗中最具发展前景的方法之一。然而,化学药物毒性比较大,化疗过程中会将正常细胞一并杀死,此外,有些药物水溶性差,容易被机体代谢,无法发挥药效,针对以上问题,在用药方法或用药途径上需要进一步改善。由天然高分子材料制备的药物载体可以起到缓释的作用和靶向的作用等,因此,在肿瘤的治疗中被广泛应用。如透明质酸(Hyaluronic acid,HA)和壳聚糖(Chitoan,CTS),其中HA可以识别肿瘤细胞表面的CD44受体,达到靶向的效果,CTS可以提高药物稳定性,达到缓释的效果。然而,单纯HA作为药物载体的稳定性差,易被降解,严重限制了它作为药物载体的应用前景;单纯用CTS作为药物的载体材料,它的载药率较低;因此,将HA和CTS交联,可以弥补相互之间的不足,增加体内稳定性,提高载药率,并且可以保留HA对肿瘤细胞的靶向性,以及CTS缓释的作用。目前,已有很多研究是关于用HA作为药物载体的靶向材料,但选用的均为大分子的HA,大分子的HA与细胞表面CD44受体是多价结合,会掩盖CD44受体的结合位点,最终导致CD44受体失活,而小分子的HA不仅能够完全与细胞表面的CD44受体结合,而且还会与内源性大分子HA竞争性的结合受体CD44,因此,可以提高对肿瘤细胞的靶向性。本论文使用CTS作为载体,低分子HA作为肿瘤细胞表面CD44受体识别材料,多西紫杉醇(Docetaxel,DTX)作为抗肿瘤药物来制备微球。主要工作如下:(1)用EDC/NHS交联的方法,将不同分子量的HA与CTS连接,其中HA包括分子量为5K的HA(5KHA)、透明质酸寡糖(Hyaluronanoligosaccharides,OHAS)和分子量为 870K 的 HA(870K HA),制得 5K HA-CTS、OHAS-CTS和 870K HA-CTS,并测得 5K HA-CTS 中 HA 的含量为 12%-14%左右,OHAS-CTS中HA的含量与5K HA-CTS的糖含量相似,在13%左右,870KHA-CTS中HA的含量为20%左右。又通过FTIR证明HA-CTS制备成功。后又将荧光染料FITC分别与载体材料CTS和HA-CTS连接,得到CTS-FITC和HA-CTS-FITC,为后续微球入胞实验做准备。(2)通过乳化交联的方法,成功制备了 CTS微球、5K HA-CTS微球、OHAS-CTS 微球、DTX-5K HA-CTS 微球、DTX-OHAS-CTS 微球、CTS-FITC 荧光微球、5KHA-CTS-FITC荧光微球和OHAS-CTS-FITC荧光微球,SEM形态观察表明,微球形态规则、表面光滑,并且微球之间无黏连。(3)运用HPLC的方法,测定微球的载药率、包封率及药物释放。载药率及包封率结果如下:药物/载体是1/7的微球包封率约为77.95%,载药率约为9.74%;药物/载体是1/5的微球包封率约为70.51%,载药率约为11.75%;药物/载体是1/3的微球包封率约为57.31%,载药率约为14.33%;药物释放实验结果如下:测药物/载体是1/7的微球、药物/载体是1/5的微球、药物/载体是1/3的微球在pH为7.4的PBS中大约4天左右药物释放完全,药物释放率均达94%左右;在pH为7.0、6.7、6.4的PBS中,微球释放的速率依次加快。(4)细胞增殖抑制实验:采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定,选取的细胞为人肺癌细胞系A549,人乳腺癌细胞MCF-7,猪内皮细胞PIEC,人正常乳腺细胞MCF-10A;通过对比发现,载药微球及纯药对癌细胞的抑制作用均明显。(5)细胞对微球的摄取情况:通过激光共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope,LSCM)观察,微球可以被细胞摄取,并且肿瘤细胞A549和MCF-7对HA-CTS微球的摄取量多于正常组织细胞PIEC和MCF-10A对其的摄取量,说明连有HA的CTS微球具有对肿瘤细胞的选择性或潜在的靶向性。由用流式细胞仪测定结果进一步证实了激光共聚焦实验结果,且发现连有OHAS比连有5K HA的CTS微球更容易进入肿瘤细胞,说明OHAS的靶向性更好一些。通过对本课题的研究,发现所制备的载体对肿瘤细胞具有缓释和靶向的作用。