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背景:肺癌是最常见、危害性最大的恶性肿瘤之一。NSCLC(Non-Small-Cell Lung Cancer,非小细胞肺癌)占肺癌的大多数。尽管肺癌的诊疗已取得了很大的进步,但是仍有部分肺癌患者在确诊时已处于肺癌晚期,无法选择手术治疗,其预后不容乐观。因此,研究新颖的肿瘤标志物作为NSCLC治疗靶标是极其必要的。研究发现98%的基因组是不具有蛋白编码功能的,这些缺乏蛋白编码功能的RNA 被统称为 ncRNAs(non-coding RNAs,非编码 RNAs)。各类 ncRNAs 的发掘及其作用机制研究日益深入,催生了以其为靶点的治疗学研究。miRNAs(microRNAs,微小核糖核酸)是一类长约22个核苷酸的单链RNA分子,参与生长发育、细胞分化和肿瘤发展等重要过程。lncRNAs(longnon-coding RNAs,长链非编码RNAs)属于一种多样化的ncRNAs,通过调控基因的表达参与多种不同的生物学过程,包括细胞印迹,组蛋白编码调控和肿瘤细胞增殖扩散。ncRNAs在NSCLC发展过程中扮演着怎样的角色,是否可以作为有价值的肿瘤标志物,这些问题对肺癌患者的诊断和治疗及其预后判断都是至关重要的,然而这一系列重要的问题仍旧需要不断去探索研究。目的:本研究重点探索三个 ncRNAs(miR-638,miR-204 和 lncRNA Meg3)在 NSCLC发展过程中的作用及其潜在的分子机制。此外,以meta分析(荟萃分析)的形式讨论另一个ncRNA(let-7)是否能预测不同肿瘤患者的预后情况。方法:第一部分和第二部分:RT-PCR检测NSCLC癌组织和对应癌旁组织中miR-638(miR-204)和SOX2(SIX1)的表达情况,并结合临床资料进行统计学分析。选取A549和SPCA1细胞,瞬时转染mimics(模拟物)和inhibitor(抑制剂)分别过表达和低表达miR-638(miR-204),并采用Tranwell、MTT(CCK8)和流式分析实验检测细胞侵袭转移、增殖和凋亡情况。选用生物信息学预测分析和Dual Luciferase reporter assay(双荧光素酶报告基因法)检测miR-638(miR-204)与SOX2(SIX1)的3’-UTR区域的靶向结合和调控作用。采用Western blot法检测EMT相关分子标志物的表达变化。第三部分:慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA Meg3的A549/DDP细胞,siRNA法构建沉默lncRNA Meg3的A549细胞,并通过MTT、流式分析实验检测IC50、细胞周期和凋亡情况。采用Western blot法检测Wnt/β-catenin通路中相关基因的表达变化。选用RT-PCR检测接受过顺铂等化疗药物治疗的晚期肺癌患者血浆样本中lncRNA Meg3的表达变化。第四部分:在PubMed,EMBASE和ISI Web of Science三个数据库中搜索大量文献,进行meta分析研究。从而,提取集中风险比率(HRs)和相应的95%可信区间(CI),并按照不同的肿瘤类型和种族划分进行亚组分析。结果:第一部分:1)miR-638低表达和SOX2高表达与NSCLC患者的肿瘤组织大小、转移和分期有关。2)miR-638低表达促进细胞侵袭转移和增殖的能力,miR-638高表达抑制细胞侵袭转移和增殖的能力。3)miR-638可与SOX2的3’-UTR区域结合并调控SOX2的表达。下调SOX2可部分废除因miR-638低表达引起的促细胞侵袭转移和增殖效应。4)miR-638可调控EMT相关分子标志物的表达。第二部分:1)在NSCLC中,miR-204表达降低,SIX1表达升高,并与肿瘤组织大小、转移和分期相关。2)miR-204可以与SIX1的3’-UTR区域结合并调控SIX1的表达来影响细胞侵袭转移和增殖能力。同时,下调SIX1可以部分逆转因miR-204低表达引起的促细胞增殖和侵袭转移的作用。3)miR-204的差异表达可调控EMT相关分子标志物的表达。第三部分:1)lncRNAMeg3在耐药细胞A549/DDP中表达量低于其在A549细胞中的表达量。2)lncRNAMeg3高表达可使A549/DDP细胞重新具有顺铂耐药性。3)lncRNAMeg3低表达降低A549细胞对顺铂耐药的敏感性。4)lncRNA Meg3通过调控Wnt/β-catenin通路相关的基因来参与肿瘤细胞周期停滞和细胞凋亡增多的过程。第四部分:1)此meta分析共搜集1757例多种不同肿瘤患者的数据资料,let-7低表达的HR为1.80(95%CI:1.18-2.76)。其中,肺癌患者let-7低表达的HR为 1.99(95%CI:1.17-3.40)。2)按种族类型进行亚组分析,发现亚洲人合并HR为1.61(95%CI:0.84-3.11),非亚洲人合并HR为 1.94(95%CI:1.11-3.39)。结论:总而言之,我们的研究结果说明:(1)miR-638低表达可以诱导EMT,并通过靶向调控SOX2来促进NSCLC细胞侵袭转移和增殖的能力。(2)miR-204通过靶向调控SIX1来扮演一个肿瘤抑制因子的作用。(3)lncRNA Meg3在肺癌患者对顺铂药物耐药性的过程中起着非常重要的作用。(4)let-7低表达可以预测肿瘤患者预后不良,尤其是肺癌患者。