目的:关节软骨因其缺乏血管、淋巴管和神经的供应的解剖特点,其自我修复再生能力十分有限,损伤后病情容易逐渐恶化,发生骨性关节炎。软骨组织工程技术的发展为这一常见损伤的治疗带来了希望。本研究拟采用多孔壳聚糖微球（porous chitosan microspheres PCMs）作为生物支架来复合脂肪间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cells ADSCs）,构建修复软骨损伤的软骨组织工程微单元,为具有软骨分化能力和良好活性的ADSCs构建一个天然的微环境,有利于向软骨细胞的转归与软骨细胞外基质(extracellular matrix（ECM）的沉积。本实验通过扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察ADSCs在PCMs上的存活情况,评价多孔壳聚糖微球的生物相容性和降解性,再进一步分析PCMs复合ADSCs后对大鼠膝关节软骨损伤的治疗效果。方法:1、体外从乳鼠腹股沟区分离和培养ADSCs,并对细胞进行细胞流式和三系分化诱导检测。2、将脂肪干细胞种植于PCMs体外构建组织工程微单元,然后利用CCK-8、扫描电镜、死活染色、激光共聚焦显微镜扫描、皮下包埋等方法检测PCMs的细胞相容性和降解性,同时观察脂肪间充质干细胞在PCMs上的黏附、增殖和生长分布情况。3、用PKH-26标记脂肪干细胞,探讨其在软骨修复过程中的转归情况。4、将构建的组织工程微单元移植到大鼠关节软骨损伤模型中,分为实验组（ADSCs+PCMs）、对照组（PCMs）和空白组（Defect）。分别在术前与术后4周、8周、12周进行Catwalk步态分析、术后12周取材行大体观察及评分、生物力学检测、组织学染色及量化评分等以评估关节软骨损伤的修复效果。结果:1、分离培养的ADSCs具有较强的增殖活性与分化能力,表达CD29、CD90（99.9%、97.6%）,不表达CD34、CD45（0.41%、0.33%）。三系诱导后的脂滴、钙结节、软骨组织内酸性黏多糖染色均为阳性结果。2、CCK-8及皮下包埋显示微球具有良好的生物相容性;扫描电镜与共聚焦显微镜扫描显示该微球具有良好的孔隙率和三维空隙结构,细胞在此球上生长良好,分泌大量的细胞外基质。3、软骨缺损的区域2周后仍残留有PKH-26标记的干细胞。4、Catwalk步态分析显示实验组的爪印面积与强度明显高于同时期的对照组;动物体内实验结果显示实验组修复效果及力学性能明显优于对照组与空白组,大体评分、组织学评分结果明显优于对照组。结论:1、从新生乳鼠上分离培养获得的ADSCs,具有较高的纯度、良好的免疫表型和较强的增殖分化能力,满足作为理想的软骨组织工程种子细胞的条件。2、多孔壳聚糖微球具有良好的多孔性和孔隙度,且具有良好的生物相容性和低免疫原性,能为脂肪间充质干细胞的增殖分化提供一个优良的三维生长环境。3、多孔壳聚糖微球复合脂肪干细胞后构建的软骨组织微单元能有效促进关节软骨损伤的自我修复再生,改善关节功能状态,且手术操作简单,为关节软骨损伤的治疗提供了一种新的思路。